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- xybiotech
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- XYMIX
- 2025年11月25日
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上海杏园瑞民生物工程有限公司
本产品反应Buffer经过改良，反应特异性更高，能抑制非特异性反应，可以在更广的范围内进行更加准确的定量。本产品使用化学保护的热启动DNA聚合酶，有效防止非特异性扩增，可以进行重复性好、可信度高的Real Time PCR解析。
适用的Real Time PCR扩增仪：Stratagene mx3000p，Thermal Cycler Dice Rea Time System（Takara），LightCycler（Roche）
产品规格：500次
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● -20℃保存。产品融解后请于4℃保存，避免反复冻融，并在6个月内用完。
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文献和实验几个复孔，选择重复性好的 CT 值参与计算。 （2）CT＜30，重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法：从以下几个方面进行问题的排查：①加样准确度；②移液器吸取液体的准确度；③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样，减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系，并且增加模板的稀释梯度，大体积加样。如：原液 cDNA 添加 1μl，可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍，添加 5μl，使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值，在操作过程中，还需要根据所用
成功做完了逆转录，这时候可能有些疲累了。筛引物、做定量的时候要加样的孔也较多，即使使用了 qPCR 预混液，也有加错样的可能发生。诺唯赞的 ChamQTM SYBR® Color qPCR Master Mix 系列（Q411 /Q421 /Q431 /Q441）提供不同颜色的试剂，利用移液过程中的变色效应，追踪移液过程，可以极大的减少移液错误。 引物设计有原则 在使用 SYBR 染料法时，引物设计需遵循以下原则：引物长度 18～25bp，产物长度 80～300bp，GC 含量 40～60
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