2×Pfu Master Mix

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产品描述：

产品名称：2×Pfu Master Mix

描述:

本制品是将PCR反应所需的Pfu酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液以及优化剂和稳定剂，预先配制成2倍浓度的混合物。2×Pfu Master Mix专为扩增克隆DNA片段优化，高保真，错误率仅为1.3×10-6。使用时只需要加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，非常方便。
 

产品特点：

高保真：Pfu DNA聚合酶是使用最广泛的高保真酶，其保真度为普通Taq酶的10倍。

灵敏：可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。

快捷：PCR反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配制。
 

实验方法：

常用反应体系（50μl）：

*Mg ²⁺终浓度为2mM

常用PCR循环：

当扩增片段＜3K；

当扩增片段≥3K（推荐引物长度≥30bp）；

使用建议：

Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端，无3´端"A"突出，除使用PCR一步定向克隆试剂盒外，其它PCR产物的克隆方案有：

（1）PCR前引物进行5´端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中。

（2）将产物3´末端加A后再与T载体连接。

（3）由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3´端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20-30mers。另外为了减少由3’→5´外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系。

储存/保存方法: -20℃

技术指标:

经检测无外源核酸酶残留；qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留；能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

产品用途: 用于要求保真度比较高的PCR反应，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等。

注意事项:
1、需要溶解完全后使用，防止离子浓度不均匀。
2、应根据实验目的选择合适的循环数，循环数过少，会造成扩增量不足。循环数过多，扩增量增加，但突变率会增加，并造成非特异性扩增。
3、根据引物Tm值设置合适的退火温度，退火温度过低，会造成非特性扩增。退火温度过高，可能扩增不到目的条带。

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