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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
2× Probe qPCR Master Mix(with ROX)
- 保质期:
3年
- 供应商:
江西江蓝纯生物试剂有限公司
- 保存条件:
低温保存
- 规格:
1 ml / 5×1 ml
| 规格: | 1 ml | 产品价格: | ¥124.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 5×1 ml | 产品价格: | ¥276.0 |
2×Probe qPCR Master Mix(with ROX)
产品特点
2 × Probe qPCR Master Mix 是专用于探针法实时荧光定量PCR 的预混体系,包含热启动 DNA Polymerase、PCR 优化的稳定剂和增强剂、dNTPs 和Mg2+,操作简便,主要用于基因组 DNA 靶序列和 RNA 反转录后 cDNA 靶序列检测,如基因表达分析,拷贝数分析,SNP 基因型分析等,适用于不同类型探针法荧光定量。本产品为2×预混荧光定量PCR反应体系,使用时只需加入模板、引物、ROX Reference Dye(用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差,根据不同荧光定量 PCR 仪选择使用)和水,使其工作浓度为1×,即可进行反应。
它具有下列特点:
1. 高灵敏度:可以精确定量低拷贝模板;
2. 高特异性:最大限度的减少引物二聚体和非特异性产物;
3. 有效性:扩增效率高,CT 值更低。
成份规格
|
产品组成 |
规格 |
|
2×Probe qPCR Master Mix |
1ml / 5×1ml |
|
50 × ROX Reference Dye I |
40μl / 200μl |
|
50 × ROX Reference Dye II |
40μl / 200μl |
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-20℃保存一年 | |
|
本产品仅供科研使用 ,不得用于其它用途 | |
使用方法
(注 意:以下举例为常规qPCR体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化)
1.根据以下表格配置反应体系,总体积为20 μl
|
试剂 |
用量 |
终浓度 |
|
2×Probe qPCR Master Mix |
10μl |
1× |
|
正义引物 (10μM) |
0.5μl |
0.25μM |
|
反义引物 (10μM) |
0.5μl |
0.25μM |
|
模板 DNA |
xμl |
/ |
|
探针(10μM) |
0.5μl |
0.25μM |
|
ddH2O |
Up to 20μl |
/ |
|
50× ROX Reference Dye I or II |
0.4μl |
1× |
注 意:
1)通常引物浓度以 0.25 μM 可以得到较好结果,可以在 0.1 ~ 1.0 μM 作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度,与使用的荧光定量 PCR 仪、探针种类、荧光标记物质种类有关,实际使用时请参照仪器说明书,或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常 DNA 模板的量以10-100 ng基因组 DNA或1-10 ng cDNA 为参照,因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同,可对模板进行梯度稀释,以确定最佳的模板使用量。
需使用 ROX Reference Dye I 的机型:
ABI Prism5700、7000、7300、7700、7900、7900HT、7900HT Fast、Step-One、Step-One Plus。
需使用 ROX Reference Dye II 的机型:
ABI Prism 7500/7500Fast、ViiA7, StratageneMX4000/MX3005P/MX3000P。
不需要使用 ROX 的机型:
Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4; Cepheid SmartCycler; Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s; Illumina Eco qPCR; Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene6000; Roche Applied Science LightCycler 480; Thermo Scientific PikoReal Cycler。
2. qPCR 反应程序,两步法 PCR:
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过程 |
温度 |
时间 | |
|
预变性 |
95℃ |
5min | |
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35-40cycles |
变性 |
95℃ |
15sec |
|
退火/延伸 |
60℃ |
30sec | |
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注 意:建议采用两步法 PCR 反应程序,若因使用 Tm 值较低的引物等原因,得不到良好的实验结果时,可尝试进行三步法 PCR 扩增,退火温度请以 55℃ - 65℃的范围作为设定参考) | |||
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