2× Probe qPCR Master Mix(with ROX)

2× Probe qPCR Master Mix(with

ROX)
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  • ¥124 - 276
  • gelatins/江蓝纯
  • JLC-G13287
  • 国内
  • 2025年07月15日
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      大量

    • 英文名

      2× Probe qPCR Master Mix(with ROX)

    • 保质期

      3年

    • 供应商

      江西江蓝纯生物试剂有限公司

    • 保存条件

      低温保存

    • 规格

      1 ml / 5×1 ml

    规格: 1 ml 产品价格:¥124.0
    规格: 5×1 ml 产品价格:¥276.0

    2×Probe qPCR Master Mix(with ROX)
    产品特点

    2 × Probe qPCR Master Mix 是专用于探针法实时荧光定量PCR 的预混体系,包含热启动 DNA Polymerase、PCR 优化的稳定剂和增强剂、dNTPs 和Mg2+,操作简便,主要用于基因组 DNA 靶序列和 RNA 反转录后 cDNA 靶序列检测,如基因表达分析,拷贝数分析,SNP 基因型分析等,适用于不同类型探针法荧光定量。本产品为2×预混荧光定量PCR反应体系,使用时只需加入模板、引物、ROX Reference Dye(用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差,根据不同荧光定量 PCR 仪选择使用)和水,使其工作浓度为1×,即可进行反应。
    它具有下列特点:

    1. 高灵敏度:可以精确定量低拷贝模板;
    2. 高特异性:最大限度的减少引物二聚体和非特异性产物;
    3. 有效性:扩增效率高,CT 值更低。
    成份规格

    产品组成

    规格

    2×Probe qPCR Master Mix

    1ml / 5×1ml

    50 × ROX Reference Dye I

    40μl / 200μl

    50 × ROX Reference Dye II

    40μl / 200μl

    -20℃保存一年

    本产品仅供科研使用 ,不得用于其它用

    使用方法
    注 意:以下举例为常规qPCR体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化)
    1.根据以下表格配置反应体系,总体积为20 μl

    试剂

    用量

    终浓度

    2×Probe qPCR Master Mix

    10μl

    正义引物 (10μM)

    0.5μl

    0.25μM

    反义引物 (10μM)

    0.5μl

    0.25μM

    模板 DNA

    xμl

    /

    探针(10μM)

    0.5μl

    0.25μM

    ddH2O

    Up to 20μl

    /

    50× ROX Reference Dye I or II

    0.4μl

    注 意:
    1)通常引物浓度以 0.25 μM 可以得到较好结果,可以在 0.1 ~ 1.0 μM 作为设定范围的参考。
    2)使用的探针浓度,与使用的荧光定量 PCR 仪、探针种类、荧光标记物质种类有关,实际使用时请参照仪器说明书,或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
    3)通常 DNA 模板的量以10-100 ng基因组 DNA或1-10 ng cDNA 为参照,因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同,可对模板进行梯度稀释,以确定最佳的模板使用量。
    需使用 ROX Reference Dye I 的机型:
    ABI Prism5700、7000、7300、7700、7900、7900HT、7900HT Fast、Step-One、Step-One Plus。
    需使用 ROX Reference Dye II 的机型:
    ABI Prism 7500/7500Fast、ViiA7, StratageneMX4000/MX3005P/MX3000P。
    不需要使用 ROX 的机型:
    Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4; Cepheid SmartCycler; Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s; Illumina Eco qPCR; Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene6000; Roche Applied Science LightCycler 480; Thermo Scientific PikoReal Cycler。
    2. qPCR 反应程序,两步法 PCR:

    过程

    温度

    时间

    预变性

    95℃

    5min

    3540cycles

    变性

    95℃

    15sec

    退火/延伸

    60

    30sec

    意:建议采用两步法 PCR 反应程序,若因使用 Tm 值较低的引物等原因,得不到良好的实验结果时,可尝试进行三步法 PCR 扩增,退火温度请以 55℃ - 65℃的范围作为设定参考)

     

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