SPA试剂盒

SPA试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体中SPA含量。
检测范围：3.125-200ng/mL
灵敏度：1.16ng/mL
规格：96T或48T/盒
SPA试剂盒基本原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗SPA抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的SPA与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗SPA抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗SPA抗体与结合在包被抗体上的SPA结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，SPA浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中SPA的浓度。
SPA试剂盒特异性：
本试剂盒用于检测SPA，经检测与其它相似物质无明显交叉反应。
由于受到技术及样本来源的限制，不可能完成对所有相关或相似物质交叉反应检测，因此本试剂盒有可能与未经检测的其它物质有交叉反应。
回收率：
分别于定值血清及血浆样本中加入一定量的SPA（加标样品），重复测定并计算其均值，回收率为测定值与理论值的比率

样本	回收率范围（%）	平均回收率（%）
血清（n=5）	86-98	93
EDTA 血浆（n=5）	91-103	96
肝素血浆（n=5）	84-96	90

线性：
在定值血清及血浆样本内加入适量的SPA，并倍比稀释成 1:2，1:4，1:8，1:16 的待测样本，线性范围即为稀释后样本中SPA含量的测定值与理论值的比率。

样本	1：2	1：4	1：8	1：16
血清（n=5）	83-95%	85-97%	93-107%	85-99%
EDTA 血浆（n=5）	95-105%	91-102%	89-99%	93-104%
肝素血浆（n=5）	87-101%	84-98%	91-103%	88-96%

SPA试剂盒结果判断:
1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。
2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
SPA试剂盒结果判断和报告常用下列几种方法表示结果：
1.定性测定
2.半定量测定 结果一般以滴度表示。
3.定量测定 即用已知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA测定，绘制标准曲线，结果以绝对量或单位表示。在ELISA定量检测中每一块反应板都必须绘制相应的标准曲线。
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