磁珠法唾液DNA提取试剂盒优惠

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北京百奥莱博专业生产供应磁珠法唾液DNA提取试剂盒优惠，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：磁珠法唾液DNA提取试剂盒优惠
产地：国产|进口
英文名：Magbead Saliva DNA Extraction Kit
品牌：百奥莱博
规格：96次
  本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的唾液DNA提取方法，适用于从在保护液 中保存的唾液中提取DNA。在高盐存在时，DNA结合于硅基包被的Magbeads表面。 漂洗后，高纯度的DNA被洗脱于Buffer EB或去离子水中。DNA的得率与样品中细胞数 量，储存条件、时间有很大关系。纯化得到的DNA纯度好(A260/280在1.7-1.9之间， A260/230大于1.5)，完整度高(大于15 kb)，可用于二代测序、芯片检测、PCR检测等下游实验。

试剂盒组成：

 

组份	96次
Buffer ML	24ml
Buffer GW1(浓缩液)	80ml
Buffer GW2(浓缩液)	50ml
Buffer MW3	96ml
Buffer EB	30ml
蛋白酶K	2×25mg
蛋白酶K 储存液	2×1.25ml
Magbeads PN	1ml

自备仪器及试剂：

1、手动单管操提取：
1)恒温混匀仪
2)2/15ml磁力架
3)异丙醇、无水乙醇

2、手动96孔深孔板提取：
1)恒温混匀仪
2)废液抽吸系统
3)手动连续分液器
4)电动连续分液器
5)手动连续分液器分液管(25ml)
6)96孔深孔板磁力架
7)异丙醇、无水乙醇

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入指定用量(1.25ml/25mg)的蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配置好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、Magbeads严禁冰冻、高速离心。冰冻和高速离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇并做好标记。
4、如Buffer ML中出现沉淀，请在56℃水浴锅中重新溶解，摇匀后即可使用。
5、实验过程中，磁珠在溶液中的充分混匀对提取的得率与纯度都有很大的影响。实验过程中务必使磁珠与溶液充分混匀。不同厂家生产的恒温混匀仪效果有一定差异，实验过程中请注意观察磁珠状态。如出现磁珠贴壁等未充分混匀的现象，请用移液器吹吸混匀或调整震荡频率。

操作步骤：

一、手动单管操作：
1、转移400μl唾液与保护剂的混合溶液至1.5ml离心管中，然后16000×g离心1分钟。
2、将离心管从离心机中取出，转移300μl上清液至新的1.5ml离心管中，之后向新的离心管加入20μl 蛋白酶K 和200μl Buffer ML。涡旋震荡混匀后，将新离心管放入56℃水浴锅中孵育1小时。此时可弃去旧离心管。
3、将离心管从水浴锅中取出，室温放置5分钟后短暂离心使溶液回流于离心管底部。向离心管中加入310μl充分混匀的异丙醇(300μl)与Magbeads(10μl)混合物，涡旋震荡5秒钟后立即放于25℃、1600 rpm的恒温混合仪上震荡混匀5分钟。
4、将离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
5、将离心管从磁力架上取下，加入750μl Buffer GW1(加入前请检查是否已加入无水乙醇)后涡旋点震1分钟或涡旋点震5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混合仪上震荡混匀2分钟(震荡过程确保Magbeads处于悬浮混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后充分弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
6、重复步骤5。
7、将离心管从磁力架上取下，加入750μl Buffer GW2(加入前请检查是否已加入无水乙醇)后涡旋点震1分钟或涡旋点震5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混合仪上震荡混匀2分钟(震荡过程确保Magbeads处于悬浮混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后充分弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
8、重复步骤7。
9、选择步骤：
1)保持离心管固定于磁力架上，用移液器去除离心管管底和管盖上的溶液，之后室温放置5-10分钟使乙醇充分挥发干净。如离心管侧壁上有液珠，可向离心管中加入750μl无水乙醇。盖盖后颠倒离心管，之后充分弃去溶液。
2)保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入750μl Buffer MW3，待悬起的磁珠重新吸附于磁力架上后立即充分弃去溶液。
10、将离心管从磁力架上取下，加入50-200μl Buffer EB。涡旋震荡使磁珠充分悬浮于洗脱液中后将其放于56℃、1600 rpm的恒温混合仪上震荡洗脱10分钟，或将离心管在56℃水浴锅中孵育10分钟，期间每隔3分钟涡旋震荡10秒钟。
11、将离心管放于磁力架上静置2分钟，待Magbeads充分吸附于离心管侧壁后用移液器将溶液转移至新的离心管中-20℃保存备用。

二、手动96孔板操作：
1、向2.0ml的96孔深孔板(简称“深孔板”)中加入500μl唾液与保护剂的混合溶液，然后在水平离心机上2000×g离心5分钟。
2、将深孔板从离心机中取出，取300μl上清液至新的深孔板中，之后向新的深孔板中加入20μl 蛋白酶K 和200μl Buffer ML。用硅胶盖将新的深孔板封闭后将其放于恒温混合仪上1500 rpm震荡2分钟，之后将新的深孔板放于56℃水浴锅中孵育1小时。此时可将旧的深孔板弃去。
3、将深孔板从水浴锅中取出，固定于25℃、1500 rpm的恒温混匀仪上震荡5分钟。
4、将深孔板从恒温混匀仪取下，短暂离心后打开硅胶盖。向深孔板中加入310μl充分混匀的异丙醇(300μl)与Magbeads(10μl)混合物，盖上硅胶盖后立即将深孔板固定于25℃、1500 rpm恒温混匀仪上震荡5分钟。
5、将深孔板从恒温混匀仪上取下放于96孔板磁力架上静置2分钟，之后用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
6、用手动连续分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW1(加入前检查是否已加入无水乙醇)，之后将深孔板固定于25℃、1500 rpm恒温混匀仪上震荡2分钟。
7、将深孔板从恒温混匀仪上取下放于96孔板磁力架上静置2分钟，之后用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
8、重复步骤6-7。
9、用手动连续分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW2(加入前检查是否已加入无水乙醇)，之后将深孔板固定于25℃、1500 rpm恒温混匀仪上震荡2分钟。
10、将深孔板从恒温混匀仪上取下放于96孔板磁力架上静置2分钟，之后用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
11、重复步骤9-10。
12、将深孔板从恒温混匀仪上取下放于96孔板磁力架上静置2分钟，之后用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
13、保持深孔板固定于96孔板磁力架上，将深孔板倒置于干净的吸水纸上放置2分钟。之后将深孔板放于100℃(由于深孔板未与加热模块直接接触，管底实际温度在50-60℃之间)的恒温混匀仪上静置5分钟。
14、用电动连续分液器或8通道移液器向深孔板中加入100-200μl Buffer EB，之后将深孔板放于100℃、1500 rpm恒温混匀仪上震荡10分钟。
15、将深孔板从恒温混匀仪上取下放于96孔板磁力架上静置2分钟，用8通道移液器将溶液转移至96孔板板中盖盖后-20℃保存备用。

储存条件：室温(15～30℃)

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·Pfu DNA Polymerase
编号：WE0107
英文名称：Pfu DNA Polymerase
规格：500U
  Pfu DNA Polymerase是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶，具有5"-3"DNA聚合酶活性和5"-3"外切核酸酶活性的同时具有3"-5"外切核酸酶活性，因此在DNA扩增过程中具有纠错能力，是目前发现的错配率最低的耐高温DNA Polymerase。该酶与Taq DNA Polymerase相比具有更好的热稳定性，对于高GC含量模板，提高变性温度对它活性无影响。使用本产品扩增得到的PCR产物的3"端不带有“A”碱基，不能直接用于T/A克隆，如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。本产品适用于基因克隆、基因定点突变、SNP和末端补平等实验。

产品组成：

组份	500U
Pfu DNA Polymerase, 5 U/μl	100μl
10×PCR Buffer	1.8ml

注意：本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM*离子。

活性定义：
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；
5、室温存放一个月，无明显活性改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
10×PCR Buffer	5μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
Pfu DNA Polymerase, 5 U/μl	0.5μl	2.5 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)Pfu酶3"-5"外切酶活性可能降解引物，所以应先加dNTP后，再加Pfu酶到反应体系中，并立即进行PCR反应。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。
2)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
3)Pfu酶具有3"-5"外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度远比Taq酶低，延伸时间根据所扩增片段大小设定，本产品的扩增延伸速率为1 kb/min。
4)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
5)本产品具有3"-5"外切核酸酶活性，PCR产物3’端不带“A”,不能直接用于T/A克隆，如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

我公司生产供应销*(代"售")的DNA纯化正全品类优惠促销，十分期待您的咨询选购磁珠法唾液DNA提取试剂盒优惠。