His标签蛋白纯化试剂盒(包涵体蛋白)厂家价格

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")His标签蛋白纯化试剂盒(包涵体蛋白)厂家价格，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：His标签蛋白纯化试剂盒(包涵体蛋白)厂家价格
规格：5ml
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：WE0266
  该镍柱纯化系统对6×His-tag蛋白具有显著特异吸附能力，能够高效一步纯化带有6个组*酸亲和标签的蛋白。该系统具有4个Ni2+螯合位点，较只有3个螯合位点的Ni-IDA结合Ni2+更为牢固，有效防止纯化过程中Ni2+脱落且增强对His标签蛋白的结合能力，提高纯化效率。较高的基团密度，大大提高了蛋白载量。该系统在天然或变性条件下，对来源于各种表达系统(如杆状病毒，哺乳细胞，酵母以及细菌)中的His标签蛋白，均有很好的纯化效果。本产品已螯合镍离子，可直接用于包涵体蛋白的纯化，使用方便，快捷。

镍柱参数：
支持物：CL-6B琼脂糖凝胶
载量：20-30 mg His标签蛋白/ml填料
粒径：50-160μM

试剂盒组成：

 

组份	5ml
Ni-Agarose Resin	5ml
Bacterial Protein Extraction Reagent	65ml
Urea	365 g
1 M Tris-HCl(pH7.9)	15ml
1 M Imidazole	65ml
3 M NaCl	120ml
Protease Inhibitor Cocktail	700μl
吸附柱(12ml)	1套

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail，-20℃；Ni-Agarose Resin，2～8℃，避免冷冻；其它组分，2～8℃

注意事项：
1、在纯化之前采用电泳检测蛋白的可溶性，本试剂盒只适合于包涵体蛋白的纯化，如需纯化可溶性蛋白，请选择我公司的可溶性蛋白纯化试剂盒，货号为WE0267。
2、缓冲液中不建议使用 β-巯基乙醇、DTT和EDTA。
3、整个纯化过程中切忌凝胶脱水变干。
4、为提高纯化效率，首先确定Binding Buffer和Elution Buffer中Imidazole(咪唑)的最佳使用浓度。必要时可以使用线性或梯度浓度的Imidazole(咪唑)(10-500 mM)洗脱蛋白，并通过SDS-PAGE或Western Blotting来检测目的蛋白的纯度。
5、请使用高纯度的试剂配制缓冲液，并通过0.22μM或者0.45μM过滤器过滤。为避免柱子被堵塞，建议将裂解液进行离心，或者使用0.22μM或者0.45μM过滤器过滤。
6、柱再生时，保证每步洗完后都要用足够的去离子水冲洗至中性。
7、如果有些蛋白采用尿素的溶解效果不好，可以采用盐*(代"酸")胍进行溶解。

使用方法：

I 缓冲液的准备
包涵体蛋白纯化缓冲液配方：

组份	Tris-HCl(pH7.9)	Imidazole	NaCl	Urea
Binding Buffer	20 mM	5 mM	0.5 M	8 M
Elution Buffer	20 mM	500 mM	0.5 M	8 M

II 组装层析柱
1、将Ni-Agarose Resin填料混匀后加入层析柱，室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。。
注意：
1)填料的上层是乙醇保护层，将填料和乙醇一起混匀，以每ml填料纯化20-30mg His标签蛋白计算，取需要的填料与乙醇的混合液加入层析柱。
2)如果乙醇不流出，可以给柱子一个外力，例如用大拇指对柱口轻轻按压一下，迫使乙醇流出。
3)本实验都是通过重力作用使溶液流出。
2．向装填好的柱中加入5倍柱体积的去离子水将乙醇冲洗干净后，再用8倍柱体积的Binding Buffer平衡柱子，平衡结束后即可上样。
注意：柱体积指的是填料的体积。

III 包涵体蛋白的纯化
1、收集菌体后，每100 mg菌体(湿重)加入2ml细菌裂解液(每1ml细菌裂解液中请预先加入10μl 蛋白酶抑制剂混合物)，如有需要可以超声裂解菌体。
注意：
1)当提取物粘度高或提取蛋白为包涵体时，建议加入DNase I和Lysozyme。每1ml 细菌抽提试剂中加入1μl DNase I(1000U/ml)，2μl Lysozyme(50 mg/ml)，DNase I和Lysozyme可单独从我公司购买，货号：Lysozyme(WE0214S)、 DNase I(WE0213S)，如使用其它公司产品，请按照相应说明书操作。
2)超声过程中保持菌液处于冰浴中，超声条件依赖于所使用的超声仪功率，探头种类，容器的大小形状，需实验中自己摸索，应避免连续超声导致的大量产热，可分成短时间，多次超声，通过一定的间隔时间避免溶液过热。最终菌液变清即可。
2、10000×g，4℃离心15分钟，分离上清和沉淀，并收集沉淀。
3、将沉淀重悬于Binding Buffer中，尽量混匀使包涵体充分溶解。
4、10000×g离心20分钟，收集上清。
注意：建议将离心后的上清以孔径为0.22μM或者0.45μM的滤膜过滤。
5、将上清负载上柱，流速为10倍柱体积/小时，收集流穿液。
注意：
1)本试剂盒中附带有一块筛板，使用时先将筛板加至填料的上层，再将处理好的上清负载上柱。该筛板可用于杂质较多的蛋白的过滤，防止过多的杂蛋白堵塞柱子，但是筛板放入柱子后不易取出。
2)通过控制加入的上清(菌体裂解液)的速度来控制流速。
6、使用15倍柱体积的Binding Buffer冲洗柱子，洗去杂蛋白。
7、使用适量Elution Buffer洗脱，收集洗脱峰。
注意：通过蛋白监测仪监测，洗脱峰可以分管收集，每1ml收集1管。
8、洗脱后，依次使用5倍柱体积的Binding Buffer，5倍柱体积的去离子水洗涤柱子，再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没)，封柱后2～8℃保存。
注意：
1)在纯化包涵体蛋白时，所有缓冲液均含有变性剂，可以降低Binding Buffer中的咪唑浓度(比5 mM更低)。洗脱时，若蛋白在较高pH下洗脱失败，可以选用低pH缓冲液作为洗脱缓冲液(pH6.5，pH5.9或pH4.5)。
2)如果是分段梯度洗脱，最大洗脱缓冲液中咪唑浓度未达到500 mM，则使用浓度为500 mM的咪唑进行洗脱10倍柱体积后，再进行第8步的操作。

Ⅳ 柱再生
当填料使用多次后，结合效率会有所下降(表现为流速变慢或填料失去蓝绿色)，可以用以下方法再生，提高填料的使用寿命和蛋白质的结合效率。
1、使用2倍柱体积的6 M盐*(代"酸")胍冲洗后，使用3倍柱体积的去离子水冲洗。
2、使用1倍柱体积的2% SDS冲洗。
3、依次使用1倍柱体积的25%、50%、75%和5倍柱体积的100%乙醇冲洗，再依次使用1倍柱体积的75%、50%和25%的乙醇冲洗。
4、使用1倍柱体积的去离子水冲洗。
5、使用5倍柱体积含50 mM EDTA缓冲液(PH8.0)冲洗。
6、使用3倍柱体积去离子水，3倍柱体积20%乙醇冲洗。
7、2～8℃保存。
8、再次使用前，需首先使用10倍柱体积去离子水冲洗，然后使用5个柱体积的50 mM NiSO4 再生，3个柱体积的Binding Buffer平衡。

储存条件：-20℃

His标签蛋白纯化试剂盒(包涵体蛋白)厂家价格正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·固定组织基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0171
英文名称：FFPE DNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒适用于从福尔马林固定、石蜡包埋的组织中有效纯化总DNA，包括基因组DNA和线粒体DNA。本品使用专门优化的裂解液和蛋白酶K，释放福尔马林固定或组织切片样本中的DNA，无需过夜操作；消化后的样品在较高的温度孵育后，去除由福尔马林交联造成的抑制作用，有效提高DNA的产量和纯度；优化的缓冲系统使裂解液中的DNA可特异结合到硅胶吸附膜上，而其他污染物可流过膜；PCR和酶反应的抑制剂以及残留的杂质可通过两步漂洗步骤有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。经过纯化的DNA可以直接用于PCR、Real-time PCR、SNP基因分型、STR基因分型和药物基因组学研究等。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
吸附柱DS及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇、10mM PBS(PH7.4)(固定液中的组织)。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、获得样品后，要尽快将样品在4%-10%的福尔马林中固定，固定时间以14-24小时为宜，时间过长易导致基因组断裂，影响下游实验。
3、确保包埋前的样品彻底脱水，残留的福尔马林会抑制蛋白酶K 的作用。
4、第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解。
6、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GL前加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如果需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。

操作步骤：
1、样本处理：
a. 石蜡包埋样本：用手术刀将组织块中多余的石蜡修剪掉，露出组织。
b. 福尔马林等固定液中的样本：取约20 mg的样本，切成小块，置于离心管中，加入500μl 10mM PBS(PH7.4),涡旋振荡，12000rpm(～～13400×g)离心1分钟，重复3次，可直接进行第7步操作。
2、将组织块切成5-10μM的薄片。
注意：如果样品表面已经暴露在空气中，请将接触空气的2-3片弃掉不用。
3、取约1×1cm2的切片(共约4-5片切片)置于离心管(自备)中，加入1ml二甲*，盖紧管盖，涡旋震荡10秒。
4、12000rpm离心2分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃沉淀。
5、加入1ml无水乙醇，涡旋震荡混匀。12000rpm离心2分钟，弃上清，注意不要吸弃沉淀。
注意：乙醇可以除去样品中残余的二甲*。
6、打开管盖，室温或最高至37℃孵育10分钟，直至无乙醇残留。
7、加入180μl Buffer GTL，重悬沉淀；加入20μl 蛋白酶K ，涡旋震荡混匀。
8、56℃孵育1小时，直至样品完全溶解。90℃孵育1小时。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸，孵育的温度过高或时间过长可能造成DNA断裂，产生DNA碎片。
2)56℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90℃后再把样品置于90℃孵育。
3)如需除去RNA，可将样品温度降到室温后，加入4μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
9、加入200μl Buffer GL，涡旋震荡彻底混匀。加入200μl无水乙醇，涡旋震荡彻底混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即充分混匀。
2)如果需要对多个样品进行操作，可以将Buffer GL和无水乙醇事先混匀后加样。
10、将步骤9所得溶液全部加入已装入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
11、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
12、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
13、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟以彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
14、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-100μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的20-100μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤14所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤14；若洗脱体积小于100μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用20μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。


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·蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂混合物
编号：WE0256
英文名称：Phosphatase Inhibitor Cocktail(100×)
规格：1ml
  组织和细胞在裂解过程中会释放大量内源性蛋白*(代"磷")酸酶，以各种方式催化磷酸化蛋白去磷酸化。本产品含四种广谱的磷酸酶抑制剂混合物，可有效抑制丝*酸/苏*酸磷酸酶、蛋白酪*酸磷酸酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等。该混合物为100倍浓缩水溶液，可直接加入任何组织类型和细胞的裂解产物中，均能有效抑制磷酸化蛋白质的去磷酸化，从而维护蛋白质的磷酸化状态。适用于Western Blot和免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质、蛋白激酶活性测定等。

使用方法：
取出实验所需蛋白抽提试剂进行预冷，按照1:99比例加入Phosphatase Inhibitor Cocktail(例如990μl抽提试剂中加入10μl Phosphatase Inhibitor Cocktail)，使其在抽提试剂中成1×工作液。

储存条件：2～8℃

·2×BAmp MasterMix(含染料)
编号：WE0106
英文名称：2×BAmp MasterMix(With Dye)
规格：5ml
  BAmp MasterMix由BAmp DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。BAmp DNA Polymerase是一种兼具高扩增效率和高保真性的耐热聚合酶。其主要特点是可以高效扩增长片段DNA，尤其在扩增>10 kb的DNA片段方面，其优势更加明显，所扩增的片段最长可以达到40 kb。该酶具有高度的延伸和校对能力，保真度高于普通Taq酶。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，重复性好。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。适用于构建基因图谱、序列测定及分子遗传学研究等。

产品组成：

组份	1ml	5ml
2×BAmp MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

注意：2×BAmp MasterMix含有BAmp DNA Polymerase,3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BAmp MasterMix(With Dye)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，BAmp DNA Polymerase的扩增效率为2.0 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


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