低背景ECL化学发光检测试剂盒厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")低背景ECL化学发光检测试剂盒厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：低背景ECL化学发光检测试剂盒厂家
英文名：cwECL Western Blot Kit
规格：50ml|250ml
编号：WE0307
产地：国产|进口
  低背景化学发光检测试剂盒是免疫印迹实验中与辣根过氧化物酶(HRP)配套使用的的低背景底物检测试剂盒。本产品能够在HRP的催化下发生化学反应而发光，可用于检测固定在膜上的蛋白质等生物大分子。其高灵敏度能够检测ng级别的抗原，发光信号强
烈持久，可以使用照相技术(X-光胶片曝光)或者其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测。

试剂盒组成：

 

组成	50ml	250ml
cwECL-A(Luminol)	25ml	125ml
cwECL-B(Peroxide)	25ml	125ml

注意事项：
1、在与膜发生接触过程中，请佩戴手套且使用干净镊子等洁净器材，避免蛋白污染及高背景。
2、避光条件下，配制好的化学发光检测底物工作液可在室温下稳定保存8小时。阳光或其他强光会影响工作液，故应避免强光长时间的照射。正常实验室灯光短时间照射不影响工作液的使用。
3、百奥莱博提供多种蛋白转移用膜、封闭液、一抗、酶标二抗、缓冲液等，详情请查询公司网站。

操作步骤：
1、二抗孵育完毕后，将印迹膜充分洗涤。
2、根据需要量，将cwECL-A和cwECL-B按照1：1的比例等体积混合，配制为发光检测底物工作液(一张8 cm×6 cm的膜大约使用1ml工作液)。
3、弃去洗涤缓冲液，将发光底物工作液滴加在印迹膜上，确保工作液覆盖整张膜，室温孵育3-5分钟。
4、用移液器吸去多余发光底物工作液，将印迹膜置于两层干净的塑料薄膜之间，此过程应小心完成，避免膜与膜之间产生气泡。
5、在暗室内进行X-光胶片曝光，或将膜放置到化学发光成像仪内，按照仪器说明书进行检测。
 

问题	可能原因	解决方法
胶片反相(白色条带，黑色背景)	系统中HRP过量	稀释HRP标记物至少10倍以上
膜上出现棕色或黄色条带
暗室中看到强烈发光
发光信号持续时间过短
信号较弱或者无信号	发光反应系统中HRP 过多，消 耗底物过快，引起信号迅速降低	稀释HRP标记物至少10倍以上
	抗原/抗体量不够	增加抗原/抗体使用量
	蛋白转移率低	优化转移系统
高背景	系统中HRP 过量	稀释HRP标记物至少10倍以上
	封闭不足	优化封闭程序
	封闭试剂选择不当	选择另一种封闭试剂
	冲洗不充分	增加冲洗时间，次数
	曝光过度	减少曝光时间
	抗原/抗体浓度过高	降低抗原/抗体使用浓度
蛋白条带为点状	蛋白转移失败	优化转移过程
	膜未平衡	按照说明书处理膜
	胶片与膜之间有气泡	曝光前去除所有气泡
出现非特异条带 (高背景、信号维持时间较短)	系统中HRP过多	稀释HRP标记物
出现非特异条带 (背景干净信号维持时间正常)	一抗用量过多	进一步稀释一抗
	SDS 导致非特异结合	在实验过程中避免使用SDS

储存条件：2～8℃，避光保存

除低背景ECL化学发光检测试剂盒厂家外，我公司正在打折促销以下产品：

·BAmp DNA Polymerase
编号：WE0105
英文名称：BAmp DNA Polymerase
规格：500U
  BAmp DNA Polymerase在具有5"-3"DNA聚合酶活性的同时具有3"-5"外切酶活性，是一种兼具高扩增效率和高保真性的耐热聚合酶。其主要特点是可以高效扩增长片段DNA，尤其在扩增>10 kb的DNA片段方面，其优势更加明显，所扩增的片段最长可以达到40 kb。该酶具有高度的延伸和校对能力，保真度高于普通Taq酶。优化的缓冲体系使酶的应用更加广泛，即使以复杂的基因组DNA为模板，也可以保证很高的特异性和长片段的扩增。特有的PCR增强剂(C-Solution)使GC含量高，有二级结构和重复序列的复杂模板也能得到高效扩增。使用本制品扩增得到的PCR产物的3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。适用于高保真度的长片段PCR扩增和复杂模板的PCR扩增，如构建基因图谱、序列测定及分子遗传学研究等。

产品组成：

组份	500U
BAmp DNA Polymerase, 5 U/μl	100μl
10×PCR Buffer	1.8ml
5×C-Solution(PCR Enhancer)	1.8ml

注意：本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM*离子。

活性定义：
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；
5、室温存放一个月，无明显活性改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
10×PCR Buffer	5μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
BAmp DNA Polymerase, 5 U/μl	0.5μl	2.5 U/50μl
5×C-Solution	10μl	1×
ddH2O up to	50μl

注意：
1)引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)当利用常规条件仍然未能得到扩增时，可以加入5×C-Solution(PCR Enhancer)，PCR增强剂可以使富含GC，有二级结构和重复序列的复杂模板到高效扩增，可以提高反应的特异性。但PCR增强剂也有可能使常规条件成功扩增的反应扩增失败，因此第一次使用PCR增强剂时建议设置一个不加PCR增强剂的对照。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，BAmp DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


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·Tris-甘*酸蛋白电泳液(pH8.3, 10×)
编号：WE0283
英文名称：Tris-Glycine SDS Buffer(pH8.3, 10×)
规格：500ml

·SDS-PAGE上样缓冲液(还原，5×)
编号：WE0288
英文名称：SDS-PAGE Loading Buffer(Reducing, 5×)
规格：5×2ml
  SDS-PAGE上样缓冲液(还原，5×)是以*酚蓝为染料，5倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液，应用于还原型SDS-PAGE的蛋白样品制备和上样。该缓冲液中含有DTT，可使蛋白质分子的链内二硫键和链间二硫键断裂，通过二硫键连接的各蛋白亚单位彼此分离，经考马斯亮蓝染色以后在电泳凝胶上显现清晰蛋白条带。

注意事项：
1、加样前在室温或37-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀，以确保溶液混合均匀。
2、本试剂含有DTT，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
3、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤：
1、将SDS-PAGE上样缓冲液(还原，5×)与蛋白样品按照1：4的比例混匀。
2、将蛋白样品置于沸水浴中加热3-5分钟。
3、待蛋白样品充分变性后冷却至室温，以小于3000 rpm的条件离心30秒。
4、离心后，以取适量上清，直接加入SDS-PAGE凝胶加样孔内, 进行常规电泳。

储存条件：-20℃


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ARB11317 人促睡眠肽(DSIP)含量测试 Human delta sleep-inducing Peptide,dsip ELISA KIT
靛玉红 Fluridone 479-41-4
ARB12657 大鼠解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA代测服务 Rat a disintegrin and metalloprotease 9,adam9 ELISA KIT
β-淀粉酶 SE 9000-91-3
亲和硅烷 Xylanase
67-97-0 维生素D
2-*-1,3-二甲基咪唑鎓六*磷酸盐 24-Epicastasterone 101385-69-7
托普霉素 D-Mannosamine HC1 32986-56-4
ARB12708 大鼠磷脂酰肌醇抗体IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)含量分析 Rat phosphatidylinositol antibody igg/igm,pi ab-igg/igM ELISA KIT
二甲*(代"酚")橙 Methyl-β-cyclodextrin  63721-83-5
003002 狗血浆
ARB12689 大鼠凝血因子Ⅷ相关抗原(FⅧ-Ag)ELISA检测服务 Rat coagulation factor Ⅷ related antigen,fⅧ-ag ELISA KIT
E0604 脱纤维裂解绵羊血(无菌)
H1101 狗血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
巴比*(代"妥")酸 NANA 67-52-7
ARB11434 人热休克蛋白90(HSP-90)Elisa定量检测 Human heat shock protein 90,hsp-90 ELISA KIT
BTN120517 零诱导培养基 Zero-induction Medium

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