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- HZbscience
- 中国/美国
- HZ-MIP1g-8
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
12个月
- 英文名：
Recombinant Macrophage Inflammatory Protein 1 Gamma (MIP1g)
- 库存：
20
- 供应商：
沪震生物
- 规格：
盒
英文名称：Recombinant Macrophage Inflammatory Protein 1 Gamma (MIP1g)
英文简称：CCL9; CCL10; SCYB9; CCF18; MRP2; C-C motif chemokine 9; Macrophage inflammatory protein-related protein 2; Small-inducible cytokine A9
物种：(Human，人)；(Mouse，小鼠)； (Rat，大鼠)等其它种属。
来源：原核表达
宿主：E.coli
性状：冻干粉
规格：10µg/50µg/200µg/1mg/1g
储存：避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月。
应用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
如果需要有生物活性的蛋白，请参见活性蛋白。
MIP1G重组蛋白不同的系统步骤稍微有些不同的，大致步骤如下：
真核表达系统的重组蛋白表达步骤：
| a. | 选择表达载体和宿主细胞（常用的CHO和HEK293） |
| b. | 表达载体的构建 |
| c. | 无内毒素的质粒抽提 |
| d. | 细胞瞬时转染 |
| e. | 表达小试，条件优化 |
| f. | 表达分析和鉴定（SDS-PGAE和WB） |
| g. | 大量表达 |
| h. | 亲和纯化 |
| i. | 检测和鉴定 |
| a. | 选择表达载体 |
| b. | 密码子优化 |
| c. | 基因合成/亚克隆 |
| d. | 转化表达菌株 |
| e. | 蛋白表达小试分析 |
| f. | 如果蛋白可溶，蛋白亲和纯化 |
| g. | 如果蛋白不可溶，则需要变复性来制备可溶蛋白。 |
| h. | 鉴定，包括SDS-PAGE和WB鉴定 |
在重组DNA技术的发展早期，人们认为在基因的前面有一个强启动子和一个起始密码子就足以在大肠杆菌中获得很好的表达。随后，认识到获得有效的翻译所需的条件要复杂得多，MIP1G重组蛋白除了要有强启动子和起始密码子外，良好的表达尚需编码目的蛋白的mRNA中含有核糖体结合位点，表达水平受密码子喜好程度的影响，也受编码序列中其他目前尚未明了的因素影响。通过改变起始密码子前端的序列，或者在不改变蛋白质序列的条件下利用密码子的简并性改变5’末端编码序列往往有助于解决问题。
通常，两个基因之间的融合表达能更快地解决这些问题。在这种方式中，目的基因被引入某个高表达蛋白序列（fusion tag）的3’末端，比如大肠杆菌的一段序列，或者任一可在大肠杆菌中高度表达的基因，它提供良好表达所必需的信号，而表达出的融合蛋白的N末端含有由fusion tag编码的片段。fusion tag所编码的可能是整个功能蛋白或是其中的部分。比如6x His Tag、β-半乳糖苷酶融合蛋白和trpE融合蛋白、谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白以及硫氧还蛋白(Trx)融合蛋白等。
H+： 原始的菌株，表达量比较低。
1A1，2D4...3D2，3D8：通过SDS-PAGE鉴定的几个高表达菌株，表达量明显提高。后面的测序结果表明，3D2和3D8的序列一模一样。
MIP1G重组蛋白展示的就是H+和3D8的5'端DNA序列的比对：
红框标记的是两条序列不一样的地方，怎么样？就变了几个碱基的序列，表达量就千差万别。这样的例子太多，值得一试！
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文献和实验Nature 子刊：中国团队在扇贝足丝蛋白仿生材料研究领域取得重要研究进展
327 ± 32%(图 1a)，超过了绝大多数天然的生物纤维（图 1b）。通过对足丝纤维部 (图 1c) 微观结构进行观察，足丝纤维由折叠的片层组成，并且富含 β-sheet 结构 (图 1d)。基于多组学技术从足丝纤维部筛选出关键蛋白组分 Sbp5-2（图 1e）, 该蛋白具有显著的序列特点：含有多个重复模块（TRM）并且富含 Cys（图 1f）。体外重组表达该蛋白的重复模块序列成功制备了仿扇贝足丝的重组蛋白纤维（图 1 g-j）。 图 1. 扇贝足丝机械性能与结构以及重组蛋白纤维制备 体外
后继的亲和纯化。目前最为流行的融合标签自然是 His-Tag，和 GST，来自 G-Biosciences 等公司都有质量非常稳定可靠的产品，种类还特别丰富，分别对应不同的上样量和工作压力和流速的需要。笔者在这里介绍一下江湖中盛传的 Tag 蛋白纯化的「刀剑笑」，目的就是为在产品选择上帮你省点事...... 「横刀」-蛋白亲和纯化 GST 树脂 G-Biosciences 的谷胱甘肽树脂，用于分离 GST 重组蛋白 用来亲和纯化带有 GST 标签的蛋白。树脂由还原性的谷胱甘肽通过 10
先来看下传统重组蛋白表达系统： 传统重组蛋白表达系统应对的挑战： 操作流程长：5天-4周时间 很多蛋白不能在细胞内成功表达 不可以改造目标蛋白 以大肠杆菌为代表的原核蛋白表达系统是常用的表达系统，具有表达量高和成本低的优点，但是蛋白质翻译后缺乏加工机制（比如形成二硫键和蛋白糖基化等），且很难保留生物活性。 以甲醇毕赤酵母为代表的酵母蛋白表达系统，具有表达量高，可诱导，糖基化机制接近真核生物等优点，但是部分蛋白产品易降解，表达量不可控。 哺乳动物细胞和昆虫
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