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100 ml
1.灵敏度高。增强型鲁米诺。可以检测仅为0.2ng的蛋白质。
2.操作简单快捷。电泳后,凝胶只需要简单的固定,染色,水洗,大约需要90分钟。
3.使用标准的实验室仪器即可操作。染色蛋白质可以使用。300nm紫外透射仪,蓝光透照器或激光扫描仪观察。
4.线性检测范围宽:至少三个数量级。
5.兼容下游分析:兼容质谱分析和测序。
6.稳定:室温保存可达一年时间。
注意:该实验步骤是针对:1毫米厚,8厘米X8厘米SDS-PAGE凝胶,更大或更厚的凝胶需要额外的试剂或者更长的孵育时间。
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文献和实验/cm2,10% gel),可根据分子量大小调整转移时间和电流大小。 B 湿法 我们基本上不用此方法,这里暂不做介绍。 C 转移后效果的鉴定 1.染胶 用考马斯亮兰染色经destain脱色后,看胶上是否还有蛋白来反映转移的效果。 2.染膜 有两类染液选择,可逆的和不可逆的。可逆的有ponceau-s red 、Fastgreen FC、CPTS等,这类染料染色后,色素可以被洗掉,膜可以用做进一步的分析用。但是不可逆的染料,如考马斯亮兰、india ink、Amido.black
实验流程:多靶点免疫荧光染色的实验操作与普通单标记免疫组化流程相似。试剂盒中的荧光染料可以在HRP酶的作用下将信号共价结合到抗原上,随后即可衔接下一轮单标染色,直至全部标记完成,即可复染DAPI后封片观察。1.脱蜡水合:1)新鲜二甲苯浸片10min,重复3次。2)梯度乙醇浸片,100% 5min;95% 5min;70% 2min。3)灭菌水洗片1min,重复3次。4)10%中性福尔马林浸片10min,灭菌水洗片1min,重复3次。2.微波修复:1)将脱蜡水合后的玻片置于修复杯中,用抗原
A general protocol for staining cell for cytometry analysis
(Cat. No. 66121A) : 0.1 M HEPES, pH 7.4; 1.4 M NaCl; 25 mM CaCl 2 . Dilute to 1X prior to use. 2. Propidium Iodide (PI). Prepare a 50 µg/ml stock solution of PI in 1X PBS buffer. Store at RT. Recommended for use in parallel with Annexin
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