RPMI 8226骨髓瘤细胞 KGG3256-1

制备单克隆抗体骨髓瘤细胞的选择

DNA，因而对HAT敏感。 目前常用的小鼠骨髓瘤细胞系为SP2 /O和NS-1 ，X63Ag8.653等。均来自BALB/c小鼠骨髓瘤。刚复苏的瘤细胞需在含10％新鲜小牛血清的RPMI-1640培养液中，5％CO2 37℃ 孵箱培养。每2～3天换液一次，3～5天传代一次，待细胞生长稳定后方可供细胞融合用。生长良好的细胞，在倒置显微镜下观察为圆形明亮，排列整齐、形态完整，密度适宜(0.1～1×106 个/ml)。经台盼蓝染色，活细胞数应>90％。实验室培养的骨髓瘤细胞最好每隔3～6个月将细胞

制备单克隆抗体骨髓瘤细胞与脾细胞的融合

制备单克隆抗体骨髓瘤细胞与脾细胞的融合   【材料和试剂】     （1）骨髓瘤细胞悬液  选好骨髓瘤细胞株，取体外培养对数生长期细胞或体内生长的肿瘤分离骨髓瘤细胞，制备细胞悬液。     （2）免疫小鼠脾细胞悬液  取3天前加强免疫的小鼠，眼眶放血，分离血清冻存备用。拉颈处死小鼠，浸泡于75％酒精中3～5min。无菌操作取出脾脏，置入盛有5ml不完全培养液的平皿中洗涤，剪去周围的结缔组织，将脾脏移入另一盛有5ml不完全培养液的平皿中的钢网上，先用剪刀

单克隆抗体制备

杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。常用的骨髓瘤细胞系见表2-4。 表2-4用于融合试验的主要骨髓瘤细胞系 骨髓瘤细胞的培养可用一般的培养液，如RPMI1640，DMEM培养基。小牛血清的浓度一般在10%～20%，细胞浓度以104～5×105/ml为宜，最大浓度不得超过106/ml。当细胞处于对数生长的中期时，可按1：3～1：10的比例传代。每3～5天传代一次。细胞在传代过程中，部分细胞可能有返祖现象，应定期用8-氮鸟嘌呤进行处理，使生存的细胞对HAT呈均一的敏感