SY0236型即用型腔肠素h北京现货促销

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")SY0236型即用型腔肠素h北京现货促销，我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：SY0236型即用型腔肠素h北京现货促销
英文名：Ready To Use Coelenterazine h
规格：10 vials
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
本品是即用的腔肠素h，特别设计用于体内成像研究。通过最小化产品成分的变化，最小化冻融次数和严格控制不同批次的产品，确保客户得到高重复性的结果。产品的优点在于：1）溶于丙二醇和柠檬酸的腔肠素h，稳定性高，即开即用，不用考虑粉末配置成液体的稳定性问题。2）预制配方，不同批次间严格控制，特别设计用于体内研究；3）即用型产品通过最小化预成像准备步骤，减少时间和精力；4）经IVIS成像系统验证，控制体内成像质量；

本包装含有10瓶无菌腔肠素h即用型溶液，每瓶含1.2ml浓度为150 μg/mL的Coelenterazine h。

腔肠素（Coelenterazine）是自然界中资源最丰富的天然荧光素，是绝大多数海洋发光生物（超过75%）的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶（Rluc），Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc），以及包括水母发光蛋白（aequorin）和薮枝螅发光蛋白（Obelia）在内的光蛋白（Photoproteins）。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生高能量的中间产物，并在此过程中发射蓝色光，峰值发射波长约为450~480nm。与甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶系统不同，腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷（ATP），因此更便于体内生物荧光的研究。因此，腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。

腔肠素还能在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光，细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强该自发光信号，因此其也可用来检测细胞/组织内活性氧（ROS）水平。

腔肠素具有能量转移的特性— —生物发光共振能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET），利用此特性，当与荧光蛋白如GFP的突变体（增强的黄色荧光蛋白，EYFP）联合使用，在底物腔肠素存在的情况下，荧光素酶（如Rluc）催化底物发生蓝光，能量随之转移到EYFP上，发出绿光（~530nm）。这两个蛋白的相互作用可以通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系来评估，适用于研究蛋白-蛋白之间的相互关系。另外，由于BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定，消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量，适用于高通量筛选如药物开发。

更为重要的一个功能，水母发光蛋白复合物（Aequorin）由22kDa的水母蛋白（Apoaequorin protein）、分子氧和底物腔肠素组成。只有当*离子（Ca2+）与该复合物结合后，腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide，同时释放出CO2和蓝色荧光（~466 nm）。正是此Ca2+依赖性的反应过程（见图1），使得腔肠素非常适用于监测活细胞内*离子水平。与常规的荧光*离子指示剂相比，其主要具有以下几个优点：
1）能检测较大范围的*浓度 – 从0.1 μM至 >100μM；
2）样品无自体荧光，背景荧光低于使用荧光*离子指示剂；虽然信号比使用荧光*离子指示剂弱，但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比，因此具有更高的灵敏度。
3）水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内，使其能够进行数小时至数天的*离子监测。



图1. 腔肠素作为水母发光蛋白辅助因子的Ca2+依赖反应流程

目前商业化的腔肠素应用最普遍的是天然腔肠素（Coelenterazine native），另外还有很多腔肠素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理论上这些腔肠素可用于相同的实验，但是由于其发光波长，细胞膜渗透性，光量子效率上的差异，使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。因此非常有必要根据具体实验目的选择最合适的腔肠素底物。
腔肠素h（Coelenterazineh）是海肾荧光素酶（Rluc）和Gaussia荧光素酶（Gluc）等多种荧光素酶的作用底物，其发光强度比天然腔肠素高10倍以上，适用于报告基因分析。也是水母发光蛋白的辅助因子，可用于检测活细胞中*离子浓度。

运输和保存方法：冰袋运输。≤-20℃避光保存，最好放到-70℃长期避光保存。

欲咨询购买SY0236型即用型腔肠素h北京现货促销，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·AP-1-Luc荧光素酶报告基因质粒
编号：SY0093
英文名称：AP-1 luciferase reporter plasmid
规格：1μg
AP-1荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（AP-1 luciferase reporter plasimd）是用于检测AP-1转录活性水平为目的的报告基因。AP-1(activating protein-1)是一类核转录因子参与转化、分化、凋亡等多种生物学功能。

AP-1报告基因主要应用于细胞中基于AP-1转录因子的信号通路活性研究、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMAP-1-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个AP-1结合位点，可以高灵敏度地检测AP-1的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得AP-1报告基因质粒更易于转染。

质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
pGMAP-1-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

储存条件：-20℃。


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·热启动高保真酶
编号：SY0038
英文名称：HotStart Pfu DNA Polymerase
规格：100U
HotStart Pfu DNA Polymerase在Pfu DNA Polymerase的基础上添加了在常温下能够抑制5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性的两种单克隆抗体，可进行高特异性的热启动(Hot Start)PCR，扩增产物为平端。Pfu DNA Polymerase是经过基因工程改造的，新一代超保真DNA聚合酶，具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性，可用于几乎所有PCR反应。其行进性 (processivity)得到了大幅度提升，即使是非常复杂的模板，也能准确快速的完成反应。其错配率是普通Taq酶的1/52，是Pfu酶的1/6；且扩增速度可以达到15秒/kb。

本产品中附带的5×HS Pfu buffer对于简单或复杂模板、短片段或长片段PCR扩增都具有良好的适应性。缓冲液中已经含有10 mM Mg2+ (1×终浓度为2 mM)，可以使用产品中提供的DMSO/MgSO4对反应体系进行优化。另外，产品中附带的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。

产品组份：
5×HS Pfu buffer(with 10 mM MgSO4)：1.25 ml
25 mM MgSO4：1 ml
dNTP Mix(10 mM each)：100 μl
HS Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)：100 μl
5×PCR Enhancer：500 μl
DMSO：100 μl
10×Loading buffer：1.25 ml

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃ 30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
储存条件：-20℃

质量控制：
核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg λ-HindⅢ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，加入2U本品，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测1：50 μl PCR体系中加入1U本品，以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的8.2 kb条带。
功能检测2：50 μl PCR体系中加入1U本品，以10 ng λDNA为模板扩增30个循环，取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 kb条带。

使用方法：
1. 所有操作请在冰上进行，各组分解冻后请充分摇匀。为了防止HS Pfu DNA Polymerase的校对活性降解引物，请将聚合酶最后加入反应体系中。各组分使用完毕后及时放回-20℃。5×HS Pfu buffer请勿长时间敞口放置。

 

ddH2O	to 50 μl
d5×HS Pfu buffer (with 10 mM MgSO4)	10 μl
d25 mM MgSO4a	optional
ddNTP Mix(10 mM each)b	1 μl
dDMSOc	optional
d5×PCR Enhancerd	optional
d模板DNAe	optional
dForward Primer(10 μM)	2μl
dReverse Primer(10 μM)	2 μl
HS Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)f	1 μl

【注】：
a. 对于大多数PCR反应，Mg2+最佳终浓度为1.5-2 mM。体系中已含有终浓度为2 mM Mg2+，如有需要，可用25 mM MgSO4，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索Mg2+最佳使用浓度。
b. 请勿使用dUTP和带有尿嘧啶的引物或模板。
c. 扩增子GC含量>60%时加入终浓度3%的DMSO有可能会有助于扩增。
d. 推荐仅当扩增子GC含量>60%且优化条件也无法正常扩增时使用；可能会降低保真度。
e. 不同模板最佳反应浓度有所不同，下表为50 μl反应体系推荐模板使用量：

模板种类/扩增长度	＜1 kb	1 kb～10 kb	＞10 kb
基因组DNA	50 ng～250 ng	100 ng～300 ng	150 ng～400 ng
质粒或病毒DNA	10 pg～20 ng	10 pg～20 ng	1 ng～30 ng
cDNA	1～5 μl(不超过PCR反应总体积的1/10)

f. 推荐的酶的终浓度为1U/50 μl反应。然而，根据扩增子的长度和复杂程度不同，可将HS Pfu DNA Polymerase在0.5-2U/50 μl反应之间进行优化。但请勿超过2U/50 μl，尤其当扩增子长度大于5 kb时。HS Pfu DNA Polymerase具有较强的校对活性。如扩增产物需要进行TA克隆，加A之前必须进行DNA纯化。

2. 推荐PCR反应条件：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性a	95℃	30 sec～3 min	1
变性b	95℃	5～10 sec	25～35循环
退火c	45℃～72℃	10～30 sec
延伸d	72℃	15～30 sec/kb
彻底延伸	72℃	5～10 min	1

【注】：
a. 推荐大多数模板的预变性温度为95℃，时间为：质粒或病毒DNA，30 sec，基因组2 min，cDNA 3 min；对于高GC含量模板，预变性温度需提升至98℃，变性时间为2～4 min；对于超过10 kb的扩增子，预变性温度需降低至92℃，变性时间不超过2 min。
b. 对于大多数模板在95℃变性时间设为5～10 sec即可。对于高GC含量模板，变性温度需提升至98℃；对于超过10 kb的扩增子，变性温度需降低至92℃，并延长变性时间至15 sec。
c. HS Pfu DNA Polymerase能够促进模板和引物高效退火。一般来说，退火温度设置为引物Tm值±3℃范围内之间即可。如果需要，可以建立一个温度梯度反应去寻找引物模板结合的最适温度。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈现弥散状。因此，推荐退火时间设置为10 sec即可。对于一些困难模板，退火时间可在10～30sec之间调整。
d. 对于大多数扩增反应，延伸过程可在72℃进行。对于超过10 kb的扩增片段，需降低延伸温度至68℃。延伸时间取决于扩增片段的长度和模板的复杂性。使用质粒等复杂程度较低的DNA做模板时，可使用15 sec/kb的延伸时间；使用基因组
cDNA等复杂程度较高的DNA做模板时，延伸时间应为30 sec/kb。太长的延伸时间会导致非特异性扩增增加，因此延伸时间请勿超过30 sec/kb。

3. 长片段PCR指南：
*使用高质量的模板；
*使用长引物。将引物加长至Tm值68～72℃，把退火/延伸温度合并为68℃。这样可以显著提高扩增特异性；
*适当提高酶量，但50μl反应体系内不要超过2 U；
*添加DMSO，以1%的浓度递增。调整范围为0%～6%；
*推荐反应条件设置：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	92℃	2 min	1
变性	92℃	5～10 sec	25～35循环
延伸	68℃	15～30 sec/kb
彻底延伸	68℃	5～10 min	1

4. 高GC含量模板PCR指南：
*使用高质量的模板；
*提高变性温度至98℃；
*添加DMSO，以1%的浓度递增。调整范围为0%～8%；
*添加5×PCR Enhancer；
*推荐反应条件设置：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	3 min	1
变性	98℃	10 sec	25～35循环
退火	45℃～72℃	10～30sec
延伸	72℃	15～30 sec/kb
彻底延伸	72℃	5～10 min	1

引物设计注意事项:
1）引物3’端最后一个碱基最好为G或者C；
2）引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。


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·小鼠抗GST-tag单克隆抗体
编号：SY0657
英文名称：GST-tag, Mouse mAb
规格：10μl(＞50次)
本品为小鼠抗GST-tag单克隆抗体，小鼠抗GST标签单克隆抗体。推荐稀释比例：WB（1:5000～50000），IP（1:5000～50000），ELISA（1:10000～50000）。

融合蛋白表达中通常在蛋白N-端或C-端加上特定蛋白或多肽序列作为一种抗原表位（标签蛋白）以便于目的蛋白后续的定位、表达、检测及纯化。Glutathione S-Transferase （即谷胱甘肽S-转移酶，GST）是应用非常广泛的一种蛋白标签，来源于Schistosoma japonicum，分子量为26kDa，可应用于各种融合蛋白，可在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达，用GST亲和柱可简便地分离融合蛋白。 GST标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其稳定性。

GST抗体可以用于GST融合蛋白后续的表达、细胞内定位，纯化、以及定性或定量分析。

产品类型：小鼠单抗（mouse McAb  IgG2a）
分子量：26 kDa
反应性：Recombinant protein, Schistosoma japonicum
应用：WB/IP/ELISA
免疫原：Recombinant Protein
纯化方式：Protein A purification
储存缓冲液（Storage Buffer）：PBS with 0.02% sodiu*(代"m") azide and 50% glycerol pH 7.3。
储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期一年。

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