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- 百奥莱博
- 北京
- WE0196-NOA
- 2025年07月04日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
室温(15～30℃)
- 保质期：
长期
- 英文名：
RNAtiqu FFPE RNA Extraction Kit
- 库存：
864
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")WE0196型固定组织RNA提取试剂盒库存，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。
名称：WE0196型固定组织RNA提取试剂盒库存
品牌：百奥莱博
英文名：RNAtiqu FFPE RNA Extraction Kit
产地：国产|进口
编号：WE0196
规格：50次
本试剂盒适用于从福尔马林固定、石蜡包埋的组织中有效纯化总RNA。适合从小于30 mg的石蜡包埋组织或切片中抽提高纯度的总RNA，本试剂盒无需使用酚/*仿抽提和异丙醇沉淀，一小时内即可完成多个样品的抽提。本品使用专门优化的裂解液和蛋白酶K，释放福尔马林固定或组织切片样本中的RNA，无需过夜操作；消化后的样品在较高的温度孵育后，去除由福尔马林交联造成的抑制作用，有效释放组织切片中的RNA，而避免危害RNA的完整性；优化的缓冲系统使裂解液中的RNA可特异结合到硅胶吸附膜上，而其他污染物可流过膜；可通过漂洗步骤有效去除，经过洗脱的RNA可直接用于RT-PCR、Real-Time PCR和印迹分析等实验。
试剂盒组成：
| 组份 | 50次 |
| Buffer GTL | 15ml |
| Buffer GL | 25ml |
| 蛋白酶K | 12.5mg |
| 蛋白酶K 储存液 | 1.25ml |
| Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
| RNase-Free Water | 10ml |
| 过滤柱FM及收集管 | 50套 |
| 吸附柱RS及收集管 | 50套 |
| RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
自备试剂：无水乙醇(新开封或提取RNA专用)、10mM PBS(PH7.4)(固定液中的组织)。
产品特点：
1、安全－无酚*仿等有机物抽提。
2、快速－可在一小时内完成实验。
3、高效－提取RNA得率高、纯度好。
4、可从石蜡包埋或福尔马林固定样品中提取高纯RNA。
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入0.625ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
3、获得样品后，要尽快将样品在4%-10%的福尔马林中固定，固定时间以14-24小时为宜，时间过长易导致RNA断裂，影响下游实验。
4、确保包埋前的样品彻底脱水，残留的福尔马林会抑制蛋白酶K 的作用。
5、第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
6、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GTL和Buffer GL于56℃水浴重新溶解。
操作步骤：
1、样本处理：
① 石蜡包埋样本：用手术刀将组织块中多余的石蜡修剪掉，露出组织。
② 福尔马林等固定液中的样本：取约20 mg的样本，切成小块，置于离心管中，加入500μl 10mM PBS(PH7.4),涡旋振荡，12000rpm(～～13400×g)离心1分钟，重复3次，可直接进行第7步操作。
2、将组织块切成5-10μM的薄片。
注意：如果样品表面已经暴露在空气中，请将接触空气的2-3片弃掉不用。
3、取约1×1cm2的切片(共约4-5片切片)置于离心管(自备)中，加入1ml二甲*，盖紧管盖，涡旋震荡10秒。
4、12000rpm离心2分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃沉淀。
5、加入1ml无水乙醇，涡旋震荡混匀。12000rpm离心2分钟，弃上清，注意不要吸弃沉淀。
注意：乙醇可以除去样品中残余的二甲*。
6、打开管盖，室温或最高至37℃孵育10分钟，直至无乙醇残留。
7、加入150μl Buffer GTL，重悬沉淀；加入10μl 蛋白酶K ，涡旋震荡混匀。
8、56℃孵育15分钟，直至样品完全溶解。80℃孵育15分钟。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸，孵育的温度过高或时间过长可能造成RNA断裂，产生RNA碎片。
2)56℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到80℃后再把样品置于80℃孵育。
9、加入320μl Buffer GL，涡旋震荡彻底混匀。
10、将步骤9中所得到的溶液全部加入到已装入收集管的过滤柱中。12000rpm离心1分钟，收集滤液。
11、在步骤10得到的滤液中，加入720μl无水乙醇，涡旋震荡彻底混匀。
注意：加入无水乙醇后，可能有少量沉淀物析出，但不影响后续操作。
12、将步骤11中所得的溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
13、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
14、重复步骤13。
15、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟以彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
16、将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-50μlRNase-Free Water，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-20℃保存RNA。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于20μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用20-50μl新的RNase-Free Water重复步骤16。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤16。
储存条件：室温(15～30℃)。
想要了解更多关于WE0196型固定组织RNA提取试剂盒库存的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息，请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品：
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WE0196型固定组织RNA提取试剂盒库存关键词：固定组织RNA提取试剂盒,RNAtiqu FFPE RNA Extraction Kit,WE0196
·血液直接PCR扩增试剂盒
编号：WE0120
英文名称：Blood Direct PCR Kit
规格：50μl×40次|50μl×200次
本试剂盒是由热启动酶、PCR Buffer、dNTPs、Mg2+以及PCR稳定剂和增强剂等组成的预混体系，本产品使用简便，无需事先提纯可直接用血液为模板扩增目的基因，可有效扩增高GC含量的模板和引物。
试剂盒组成：
| 组份 | 50μl×40次 | 50μl×200次 |
| 2×Blood Direct PCR Mix | 1ml | 5×1ml |
| ddH2O | 1ml | 5×1ml |
注意事项：建议使用时添加≤10%的全血为模板，加上血液后用涡旋器将管中各组分轻轻混匀。
使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 20μl反应体系 |
| 2×Blood Direct PCR Mix | 25μl | 10μl |
| Forward Primer，10μM | 1μl | 0.4μl |
| Reverse Primer，10μM | 1μl | 0.4μl |
| Template Blood | 0.5-5μl | 0.25-2μl |
| ddH2O | up to 50μl | up to 20μl |
注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 2 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 35-40个循环 |
| 退火 | 55-60℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 30-60 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min |
注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所含热启动酶的扩增效率为1-2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件：-20℃，避免反复冻融。
WE0196型固定组织RNA提取试剂盒库存关键词：固定组织RNA提取试剂盒,RNAtiqu FFPE RNA Extraction Kit,WE0196
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