Pfu DNA Polymerase多少钱

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北京百奥莱博专业生产供应Pfu DNA Polymerase多少钱，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：Pfu DNA Polymerase多少钱
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：Pfu DNA Polymerase
规格：500U
编号：WE0107
  Pfu DNA Polymerase是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶，具有5"-3"DNA聚合酶活性和5"-3"外切核酸酶活性的同时具有3"-5"外切核酸酶活性，因此在DNA扩增过程中具有纠错能力，是目前发现的错配率最低的耐高温DNA Polymerase。该酶与Taq DNA Polymerase相比具有更好的热稳定性，对于高GC含量模板，提高变性温度对它活性无影响。使用本产品扩增得到的PCR产物的3"端不带有“A”碱基，不能直接用于T/A克隆，如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。本产品适用于基因克隆、基因定点突变、SNP和末端补平等实验。

产品组成：

 

组份	500U
Pfu DNA Polymerase, 5 U/μl	100μl
10×PCR Buffer	1.8ml

注意：本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM*离子。

活性定义：
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；
5、室温存放一个月，无明显活性改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
10×PCR Buffer	5μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
Pfu DNA Polymerase, 5 U/μl	0.5μl	2.5 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)Pfu酶3"-5"外切酶活性可能降解引物，所以应先加dNTP后，再加Pfu酶到反应体系中，并立即进行PCR反应。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。
2)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
3)Pfu酶具有3"-5"外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度远比Taq酶低，延伸时间根据所扩增片段大小设定，本产品的扩增延伸速率为1 kb/min。
4)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
5)本产品具有3"-5"外切核酸酶活性，PCR产物3’端不带“A”,不能直接用于T/A克隆，如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

我公司的Pfu DNA Polymerase多少钱，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
J0302 兔抗猴IgG(H+L)抗血清 1ml/10ml
ARB11017 人层连蛋白/板层素(LN)免费代测 Human laminin,ln ELISA KIT
*磺隆 MT 64902-72-3
PY06-009  李斯特氏菌显色培养基  1000ml，用于李斯特氏菌属细菌的快速分离与鉴别
ARB13212 小鼠凋亡相关因子(FAS/CD95)elisa测定使用说明书 Mouse factor-related apoptosis,fas ELISA KIT
八烷基三甲基*化铵 2′-dC 10108-86-8
ARB11856 人糖化蛋白(GSP)血清中含量检测 Human glycosylated serum protein,gsp ELISA KIT
靛蓝胭脂红 Pyruvic acid 860-22-0
CYB161072 猴IgG(冻干粉)
D0301 脱纤维绵羊血(无菌 pet瓶装)
BL0906 FITC标记兔抗猴IgG抗体
*化铈 CBZ-L-Arg 18618-55-8
ARB11806 人颗粒酶A(Gzms-A)elisa检测操作说明书 Human granzymes a,gzms-a ELISA KIT
BL0903 FITC标记羊抗牛IgG抗体
Pfu DNA Polymerase多少钱关键词：WE0107,Pfu DNA Polymerase


·蛋白快速染色液
编号：WE0278
英文名称：FastStain Protein Staining Reagent
规格：500ml
  本产品采用独特的配方，可对电泳后凝胶上的蛋白质条带进行染色，而对凝胶本底几乎没有着色。染色过程仅需15分钟，染色后几乎不需要脱色。本产品灵敏度高，可检测到15ng BSA蛋白；若实验对检测灵敏度有较高要求，可将凝胶放置在染色液中2小时，可达到最大灵敏度(BSA：5ng)。

注意事项：
1、操作时请务必佩戴手套，如溅到皮肤上，请立即用大量水冲洗。
2、染色前的凝胶洗涤非常重要，否则会造成凝胶染色背景加深。
3、如染色后有轻微背景，可将染色后的凝胶用过量蒸馏水室温洗涤、脱色。
4、本产品适用于变性和非变性凝胶电泳后的蛋白染色。

操作步骤：

I 常规操作步骤：
1、常规PAGE电泳完成后，小心取下凝胶，根据凝胶的大小，将其放置在一个可微波加热的容器中。
2、加入足量的纯水，使凝胶可以在其中自由晃动，微波加热至沸腾。室温晃动2 min，彻底弃去水。
3、取20-25ml(以液面刚好覆盖凝胶为宜)凝胶染液加入到纯水洗涤后的凝胶的盒中，使其足以没过凝胶，轻轻晃动。并在微波炉中高火加热至沸腾，取出后室温轻轻摇动，5-10 min后凝胶中的蛋白条带开始显色，15 min后显色基本完成。
注意：此操作检测的灵敏度为：用BSA检测，灵敏度为15ng。若实验对检测灵敏度有较高要求，可将凝胶放置在染色液中2小时，可达到最大灵敏度(用BSA检测，灵敏度为5ng)。

II 快速助染步骤：
1、常规PAGE电泳完成后，小心取下凝胶，根据凝胶的大小，将其放置在一个可微波加热的容器中。
2、加入足量的纯水，使凝胶可以在其中自由晃动，微波加热至沸腾。室温晃动2 min，弃去水。
3、重复步骤2两次。
4、取20-25ml(以液面刚好覆盖凝胶为宜)凝胶染液加入到含纯水洗涤后的凝胶的盒中，使其足以没过凝胶，轻轻晃动后，微波高火加热至沸腾，取出后置于室温并轻轻晃动，5-10 min后凝胶中的蛋白条带开始显色，15 min后显色完成。
注意：此操作检测的灵敏度为：用BSA检测，灵敏度为5ng。

储存条件：室温


Pfu DNA Polymerase多少钱关键词：WE0107,Pfu DNA Polymerase


·低背景ECL化学发光检测试剂盒
编号：WE0307
英文名称：cwECL Western Blot Kit
规格：50ml|250ml
  低背景化学发光检测试剂盒是免疫印迹实验中与辣根过氧化物酶(HRP)配套使用的的低背景底物检测试剂盒。本产品能够在HRP的催化下发生化学反应而发光，可用于检测固定在膜上的蛋白质等生物大分子。其高灵敏度能够检测ng级别的抗原，发光信号强
烈持久，可以使用照相技术(X-光胶片曝光)或者其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测。

试剂盒组成：

组成	50ml	250ml
cwECL-A(Luminol)	25ml	125ml
cwECL-B(Peroxide)	25ml	125ml

注意事项：
1、在与膜发生接触过程中，请佩戴手套且使用干净镊子等洁净器材，避免蛋白污染及高背景。
2、避光条件下，配制好的化学发光检测底物工作液可在室温下稳定保存8小时。阳光或其他强光会影响工作液，故应避免强光长时间的照射。正常实验室灯光短时间照射不影响工作液的使用。
3、百奥莱博提供多种蛋白转移用膜、封闭液、一抗、酶标二抗、缓冲液等，详情请查询公司网站。

操作步骤：
1、二抗孵育完毕后，将印迹膜充分洗涤。
2、根据需要量，将cwECL-A和cwECL-B按照1：1的比例等体积混合，配制为发光检测底物工作液(一张8 cm×6 cm的膜大约使用1ml工作液)。
3、弃去洗涤缓冲液，将发光底物工作液滴加在印迹膜上，确保工作液覆盖整张膜，室温孵育3-5分钟。
4、用移液器吸去多余发光底物工作液，将印迹膜置于两层干净的塑料薄膜之间，此过程应小心完成，避免膜与膜之间产生气泡。
5、在暗室内进行X-光胶片曝光，或将膜放置到化学发光成像仪内，按照仪器说明书进行检测。
 

问题	可能原因	解决方法
胶片反相(白色条带，黑色背景)	系统中HRP过量	稀释HRP标记物至少10倍以上
膜上出现棕色或黄色条带
暗室中看到强烈发光
发光信号持续时间过短
信号较弱或者无信号	发光反应系统中HRP 过多，消 耗底物过快，引起信号迅速降低	稀释HRP标记物至少10倍以上
	抗原/抗体量不够	增加抗原/抗体使用量
	蛋白转移率低	优化转移系统
高背景	系统中HRP 过量	稀释HRP标记物至少10倍以上
	封闭不足	优化封闭程序
	封闭试剂选择不当	选择另一种封闭试剂
	冲洗不充分	增加冲洗时间，次数
	曝光过度	减少曝光时间
	抗原/抗体浓度过高	降低抗原/抗体使用浓度
蛋白条带为点状	蛋白转移失败	优化转移过程
	膜未平衡	按照说明书处理膜
	胶片与膜之间有气泡	曝光前去除所有气泡
出现非特异条带 (高背景、信号维持时间较短)	系统中HRP过多	稀释HRP标记物
出现非特异条带 (背景干净信号维持时间正常)	一抗用量过多	进一步稀释一抗
	SDS 导致非特异结合	在实验过程中避免使用SDS

储存条件：2～8℃，避光保存

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