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- 百奥莱博
- 北京
- WE0125-HRQ
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃，避免反复冻
- 保质期：
长期
- 英文名：
HiFi PCR Mix for NGS
- 库存：
202
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博供应的高保真多重PCR Mix(下一代测序用)特价优惠用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多高保真多重PCR Mix(下一代测序用)等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。
名称：高保真多重PCR Mix(下一代测序用)特价优惠
英文名：HiFi PCR Mix for NGS
产地：国产|进口
规格：1ml|5ml
编号：WE0125
本品是由热启动酶、PCR Buffer、dNTPs、Mg2+以及PCR稳定剂和增强剂等组成的预混体系，具有高保真性、高延伸性、低偏好性的特点，对复杂的DNA模板(如高GC含量模板)有均衡的扩增效率，特别适合于二代建库中多重PCR的扩增。
本品所含的高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免了在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增。独特的缓冲体系与热启动酶的组合，显著提高了PCR的扩增效率，扩增范围更广泛。本产品有效提升了基因组中高GC或高AT区域的扩增效率，降低扩增偏好性从而提高测序覆盖度。
产品组成：
| 组份 | 1ml | 5ml |
| 2×HiFi PCR Mix | 1ml | 5×1ml |
| ddH2O | 1ml | 5×1ml |
注意事项：
1、该产品不适用于有修饰的引物。
2、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
3、避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 |
| 2×HiFi PCR Mix | 25μl |
| Primer Pool | 0.1 -0.3μM |
| DNA or cfDNA | 5ng-100ng |
| ddH2O | up to 50μl |
注意：引物浓度请以终浓度0.1-0.3μM作为设定范围的参考。
2、PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 2 min | |
| 变性 | 98℃ | 20 s | 30-40 个循环 |
| 退火延伸 | 65℃ | 90 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min |
注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件：-20℃，避免反复冻融。
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文献和实验）的乳液环境中经 PCR扩增，由于此处只使用了一对针对接头的引物（有一条PCR引物的5’ 端被固定在微珠表面），因此进行的是 多模板PCR（multi-template PCR）而不是多重PCR（multiplex PCR）。另外，由于在模板浓度还很低的情况下， 大部分包裹着微珠的微乳液滴中最多只能有一条引物，因此经过PCR扩增之后，每一个微珠表面上都只会连接上一 种模板分子的扩增产物。打破微乳液滴，将这些携带有大量模板分子的微珠收集起来制成芯片。（b）Illumina测序 仪中使用的桥式PCR技术
Expand High Fidelity PCR--高保真PCR
will have at least one mutation. See Boehringer data sheet for more details on error rate. Mix in an 0.2 ml thin wall microfuge tube: 1 microliter each: dATP, dGTP, dCTP, dTTP (10 mM solutions) 100 ng each primer (20-mer) 5 microliters Expand buffer +15 mM MgCl2
，就开始了多重PCR的引物设计。第一次设计的是个四重PCR，四队引物的设计花了我不少时间，为了保证四队引物的相互兼容性以及扩增效率的一致性，需要对四队引物以及引物对之间逐一配对分析，这里没有巧办法，所需只是耐心和时间而已。引物设计合成后，开始了配液，当时采用的PCR试剂都是各个单体，不像现在，大家都习惯用商业化的mix，包括 10x Buffer里都是不含MgCl2或MgSO4的，各个试剂之间安装均匀设计表，进行梯度设计。通过PCR后电泳，找出最佳的试剂梯度组合。第一次的实验还算比较顺利，可能是由于前期
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