高保真多重PCR Mix(下一代测序用)

特别提示：包括高保真多重PCR Mix(下一代测序用)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：高保真多重PCR Mix(下一代测序用)
英文名称：HiFi PCR Mix for NGS
产品货号：WE0125
产品规格：1ml|5ml

  本品是由热启动酶、PCR Buffer、dNTPs、Mg2+以及PCR稳定剂和增强剂等组成的预混体系，具有高保真性、高延伸性、低偏好性的特点，对复杂的DNA模板(如高GC含量模板)有均衡的扩增效率，特别适合于二代建库中多重PCR的扩增。

本品所含的高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免了在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增。独特的缓冲体系与热启动酶的组合，显著提高了PCR的扩增效率，扩增范围更广泛。本产品有效提升了基因组中高GC或高AT区域的扩增效率，降低扩增偏好性从而提高测序覆盖度。

产品组成：

组份	1ml	5ml
2×HiFi PCR Mix	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

注意事项：
1、该产品不适用于有修饰的引物。
2、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
3、避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系
2×HiFi PCR Mix	25μl
Primer Pool	0.1 -0.3μM
DNA or cfDNA	5ng-100ng
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-0.3μM作为设定范围的参考。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	2 min
变性	98℃	20 s	30-40 个循环
退火延伸	65℃	90 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

除了高保真多重PCR Mix(下一代测序用),，我公司还供应以下相关产品：



名称：PCR级海藻糖溶液
货号：BTN130506
规格：1.5mL
本产品为浓度为5M的海藻糖的水溶液，可以直接添加到PCR反应体系或逆转录反应中提高酶的热稳定性和活性。

产品特点：
1.在反应体系中加入海藻糖，可以增加热敏感的酶在高温下的稳定性和活性。
2. 海藻糖能增加鼠白血病病毒逆转录酶(Reverse Transcripatase)的热稳定和热激活特性，使其在60℃仍具有全部活性，足以在mRNA二级结构诱导终止反应之前合成全长的cDNA，反应效率大大提高。
3. 有助于提高干燥保存的酶的活性。

储存条件：低温运输，4℃保存，保存期一年

使用方法：按照1/3体积，将本产品加入到PCR体系中即可。

名称：结核分枝杆菌基因分型试剂盒(HV-3)
货号：WE0119
规格：50次
  本试剂盒是以分子流行病学zuì新研究进展为基础，经工艺优化后形成的人型结核分枝杆菌基因分型产品。本产品利用结核分枝杆菌基因组中可变数目串联重复序列(variable-number tandem repeats, VNTR)多态性进行基因型分型区分临床菌株，是研究结核分枝杆菌分子流行病学和监测结核病传播状况的有力工具。与现有其它基于VNTR原理的结核分枝杆菌VNTR分型系统相比，这一分型系统对中国流行的菌株具有更强的分辨能力 ，因此特别适合于中国用户的需求。

  通过对各PCR反应引物序列和预混反应液成份进行精心优化，使得本产品具有很强的抗干扰力。与用户自配试剂相比，本产品显著提升了特异条带信号强度，降低了使用粗制模板(煮沸菌液)时非特异条带的出现率，使实验操作更加简便、快捷的同时，提高了检测成功率。本产品的预混反应液化学稳定性良好，能有效抵抗反复冻融(10次)和较长时间(一周)的室温环境，更好地适应了用户检测工作中的灵活性需求。

  本试剂盒是TB基因分型试剂盒VNTR-9(货号WE0118)的配套产品。对VNTR-9试剂盒鉴定为成簇或相同菌株的样本，如有必要，可使用本产品做更精细的进一步分型鉴定。本产品中的3个高分辨率检测位点VNTR3820，VNTR4120和VNTR3232与VNTR-9中的9个检测位点结合使用可将检测的分辨率指数(Hunter-Gaston index，HGI)提升至0.993 。

名称：通用型动物组织PCR试剂盒
货号：SY0049
规格：50T|200T
该试剂盒可用于转基因型鉴定、动物基因分型等多种大规模基因检测。动物组织直接PCR试剂盒是一种可直接对不同动物组织进行PCR扩增的试剂盒，适应性广、稳定性强。试剂盒中采用独特的裂解缓冲液体系，可以简便快速的裂解多种动物组织样品并释放出基因组DNA。整个过程不需要除去蛋白、RNA及其它次生代谢物，也无需有机溶剂抽提，即可得到质量稳定的基因组DNA，无需后续纯化步骤即可直接用于PCR反应。而且样品需求量小，少到5mg动物组织即可进行实验。

试剂盒中提供的 2×Tissue Master Mix 具有很强的扩增兼容性，能直接以待测样品裂解液为模板，进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合物，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，并以dUTP替代了dTTP，另外加入了能够降解含有dUTP 模板的 UNG 酶(Uracil-N-glycosylase)。在PCR反应前，利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR产物，UNG 酶对不含有尿嘧啶的模板不会造成任何影响，从而保证扩增的特异性和准确性，防止了大规模基因检测时可能出现的PCR产物污染问题。优化的2×Tissue Master Mix与直接裂解液配合使用能够快速简便地对样品进行检测，并具有灵敏度高、兼容性强、特异性强、稳定性好等特点。

产品组分：

组分	50T	200T	储存
2×Tissue MasterMix*	500 μl	1 ml×2	-20℃
Buffer AL	5 ml	20 ml	室温或4℃
Protease	220 μl	880 μl	4℃
6×DNA Loading Buffer	1.5ml	1.5ml	4℃

注：2×Tissue Master Mix中包含Tissue Taq DNA 聚合酶、UNG酶、dNTP（dUTP替代了dTTP）、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂和稳定剂。

保存方法
① 本试剂盒的2×Tissue Master Mix保存在-20℃，避免反复冻融。
② Buffer AL在常温干燥条件下，可保存12个月，如需保存更长时间可置于4℃。
③ Protease溶液具有独特配方，常温保存（25℃）可长期具有活性，在4℃保存，其活性和稳定性会更好，因此建议将其置于在4℃保存，请勿置于-20℃保存。

注意事项
1）本试剂盒适用于常规PCR，请勿用于多重PCR鉴定；建议扩增片段在1kb以内。
2）注意实验用具的清洁以及实验的操作手法，避免样本间的交叉污染。
3）建议采用新鲜采取的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。
4）Buffer AL若低温保存，容易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间，也可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀，混匀后再使用。
5）电泳检测时，切勿使用含有 SDS 的 Loading Buffer，否则在电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带，影响实验结果。
6）建议设立阳性及阴性对照反应。阳性对照可用50ng纯化的动物DNA为模板，阴性反应以ddH2O为模板，引物可采用以前成功扩增的引物。
7）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作方法

1. 取5-10mg动物材料，置于离心管中。尽量剪碎动物材料，以使之后的酶解反应容易进行。
2. 取100μl Buffer AL并加入4μl Protease，涡旋混匀。
3. 向混合液中加入动物组织，涡旋混匀。
4. 65℃孵育10-30min，然后95℃处理5min。
【注】：65℃孵育，一般只需10min即可满足多数PCR需求。若需要的DNA量较大或样品较难酶解，可以将时间延长至30min。组织块不需完全酶解，残余的部分在后续离心步骤中可被除去。
5. 12,000 rpm (~13,400×g )离心5min。
6. 转移上清至新的离心管，4℃或-20℃放置备用或直接用于PCR扩增。
【注】：用于后续PCR检测时，模板量占PCR体系的1-10%之间zuì佳，不能超过20%。如50μl 的PCR体系中，加入0.5-5μl 裂解液即可，但不能超过10μl。
7. PCR反应体系配制*
按照下表配制PCR反应体系，配置好反应体系后，短暂涡旋充分混匀并瞬时离心，将所有试剂收集到管底。

ddH2O	Up to 20μl
2×Tissue Master Mix	10μl
正向引物（10μM）	0.5μl
反向引物（10μM）	0.5μl
模板 DNA	xμl

【*】：① 配制的PCR反应体系可根据所需终体系（如50μl）按照该比例进行调整。
② 通常引物终浓度为0.2-0.25μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可以在0.1-0.5μM范围内调整引物浓度。
8. PCR反应条件设置
此表PCR反应条件仅供参考。PCR反应条件因模板、引物等的结构条件不同而各异。具体操作中需要根据模板类型、目的片段大小、扩增片段的碱基序列和引物的GC含量及长短等具体情况来优化zuì佳的反应条件，包括退火温度，延伸时间等。

循环步骤	温度	时间	循环数
UNG酶处理	50℃	5min	1
灭活UNG酶&预变性	94℃	5min	1
变性	94℃	10sec	30-40循环
退火a	50-65℃	20sec
延伸b	72℃	30 sec/kb
彻底延伸	72℃	5min	1

【注】：a. PCR程序中的退火温度需根据引物的Tm值自行设置；
b. 延伸时间需要根据片段的长度来确定，对于1kb以内的DNA片段，建议延长时间为30秒。