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文献和实验同一个靶点,做敲除两周就能看到明显的 indel,做敲入两个月可能还拿不到一个正确的克隆。这不是操作水平的问题,而是两条技术路径依赖的细胞机制完全不同。 先说结论:敲除依赖 NHEJ,它在整个细胞周期都活跃、不需要模板、速度快,所以效率天然高;敲入依赖 HDR(或同源非依赖的其他路径),HDR 只在 S/G2 期活跃、需要外源供体模板进入细胞核并与断裂末端同源重组,效率通常只有百分之几甚至更低。此外,敲入还要面对"编辑后的等位基因被 Cas9 再次切割"和"随机整合的供体模板产生假阳性"两个
一、饲养环境 小鼠对环境的适应性的自体调节能力和疾病抗御能力较其他实验动物差,而小鼠的品种和品系繁多,各个品种和品系都有自己的特殊要求,因此必须根据实际情况给予一个清洁舒适的生活环境。不同等级的小鼠应生活在相应的设施中。 小鼠临界温度为低温 10℃,高温 37℃,温度中性范围 30~33℃。饲养环境控制应达到如下要求:温度 18~29℃;相对湿度 40~70%;最好控制在 18~22℃,湿度 50~60%。一般小鼠饲养盒内温度比环境高 1~2℃,湿度高 5~10%。 要保持温度、湿度相对稳定
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