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Ni-Agarose Resin
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
Ni琼脂糖凝胶优惠促销是高品质的蛋白质研究产品,由北京百奥莱博供应,用于生化研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多Ni琼脂糖凝胶等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。
名称:Ni琼脂糖凝胶优惠促销
英文名:Ni-Agarose Resin
规格:10ml
产地:国产|进口
编号:WE0272
品牌:百奥莱博
该镍柱纯化系统对6×His-tag蛋白具有显著特异吸附能力,能够高效一步纯化带有6个组*酸亲和标签的蛋白。该系统具有4个Ni2+螯合位点,较只有3个螯合位点的Ni-IDA结合Ni2+更为牢固,有效防止纯化过程中Ni2+脱落且增强对His标签蛋白的结合能力,提高纯化效率。较高的基团密度,大大提高了蛋白载量。该系统在天然或变性条件下,对来源于各种表达系统(如杆状病毒,哺乳细胞,酵母以及细菌)中的His标签蛋白,均有很好的纯化效果。本产品已螯合镍离子,可直接使用,方便,快捷。
支持物:CL-6B琼脂糖凝胶
载量:20-30 mg His标签蛋白/ml填料
粒径:50-160μM
注意事项:
1、缓冲液中不建议使用 β-巯基乙醇、DTT或EDTA。
2、整个纯化过程中切忌凝胶脱水变干。
3、为提高纯化效率,首先确定Binding Buffer和Elution Buffer中咪唑的最佳使用浓度。可以使用线性或梯度浓度的咪唑(20-500 mM)洗脱蛋白,并通过SDS-PAGE或Western Blotting来检测目的蛋白的纯度。
4、为避免柱子被堵塞,请使用高纯度的试剂配制缓冲液,并通过0.45μM过滤器过滤。建议将裂解液进行离心,或者使用0.45μM过滤器过滤。
5、柱再生时,保证每步洗完后都要用足够的去离子水冲洗至中性。
使用方法:
I 缓冲液的准备
1、可溶性蛋白纯化缓冲液配方:
成分 | Tris-HCl(PH 7.9) | 咪唑 | *化* |
Soluble Binding Buffer | 20 mM | 10 mM | 0.5 M |
Soluble Elution Buffer | 20 mM | 500 mM | 0.5 M |
成分 | Tris-HCl(PH 7.9) | 咪唑 | *化* | 尿素/盐*(代"酸")胍 |
Inclusion Body Binding Buffer | 20 mM | 5 mM | 0.5 M | 8 M/6 M |
Inclusion Body Elution Buffer | 20 mM | 500 mM | 0.5 M | 8 M/6 M |
试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
Taq PCR Buffer,10× | 5μl | 1× |
dATP,10 mM | 1μl | 200μM |
dGTP,10 mM | 1μl | 200μM |
dCTP,10 mM | 1μl | 200μM |
dTTP,10 mM | 0.5μl | 100μM |
dUTP,10 mM | 1μl | 200μM |
Forward Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
Reverse Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
Template DNA | Xμl | |
Taq DNA Polymerase,5 U/μl | 0.5μl | 2.5 U/50μl |
Uracil-N-Glycosylase,1 U/μl | 0.2μl | 0.2 U/50μl |
ddH2O | up to 50μl |
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
UNG消化 | 37℃-50℃ | 5-10 min | |
预变性 | 95℃ | 10 min | |
变性 | 94℃ | 30 s | 30-40个循环 |
退火 | 55-65℃ | 30 s | |
延伸 | 72℃ | 1 kb/min | |
终延伸 | 72℃ | 5 min |
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