北京DH5α感受态细胞厂家

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京DH5α感受态细胞厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京DH5α感受态细胞厂家
编号：WE0252
规格：100μl×10支
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
  本产品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA热击转化。DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株，其φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶*基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。使用pUC19质粒检测，转化效率可达108，适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。

产品组成：

 

组份	0.1ml×10支
DH5α Competent Cell	10×100μl
Control DNA pUC19，0.1ng/μl	10μl

实验前准备及重要注意事项
1、感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2、转化所有步骤均在无菌条件下操作。
3、包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA，供对照试验使用。

使用方法：
1、取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2、待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3、42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4、向每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5、根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，
倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意：
1)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2)新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

储存条件：-80℃。

想要了解更多关于北京DH5α感受态细胞厂家的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息，请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品：
DR0301 多功能DNA纯化回收试剂盒
亚磷酸*二*五水合物 Amylopectin 13517-23-2
单硬脂酸甘油酯 Actin from rabbit muscle 123-94-4
BL1092 澳洲胎牛血清
6-羟基-2,5,7,8-四甲基*并二*吡喃-2-羧酸 Guanine HC1 53188-07-1
BL1232 1M Hepes溶液(PH7.2-7.4,无菌)
4-羟基偶氮* Calcium Glycinate 1689-82-3
ARB12921 小鼠白细胞介素5(IL-5)ELISA代测服务 Mouse interleukin 5,IL-5 ELISA KIT
ARB12293 大鼠抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)含量分析 Rat anti-cardiolipin antibody igm,aca-igM ELISA KIT
四丁基*化铵 BTA 1643-19-2
2-*基-1-*乙醇 Phenyl Sepharose 6 Fast Flow (High sub) 7568-93-6
ARB12248 大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13/vWF-cp)Elisa定量检测 Rat von willebrand factor cleaving protease,adamts-13/vwf-cp ELISA KIT
SJ0714 40%丙*(代"烯")酰胺
核糖核酸酶抑制剂 Tropaeolin O sodiu*(代"m") salt
胰蛋白酶(牛胰) Snailagglutinin 9002-07-7
F030111 HRP标记羊抗乙肝核心抗原抗体 HRP*Polyclonal Goat Anti-HBcAg
ARB12847 小鼠内毒素(ET)酶联免疫定量检测 Mouse endotoxin,et ELISA KIT
F010113 小鼠抗呕吐毒素抗体 Monoclonal Mouse Anti-deoxynivalenol
F030432 胶体金标记小鼠抗猪IgG抗体 Monoclonal Mouse Anti-Pig IgG*GOLD
L-缬*酸 o-Vanillin 72-18-4
北京DH5α感受态细胞厂家关键词：WE0252,DH5α感受态细胞,DH5α Competent Cell

5-*-2-脱氧尿苷 L-Arginine ethyl ester dihydrochloride 59-14-3
ARB11449 人铁调素Hepcidin 酶免分析 Human hepcidin ELISA KIT
ARB14209 大鼠还原型辅酶Ⅱ(NADPH)血清中含量检测 
PY02-002  伊红美蓝琼脂(EMB)  250克  
BL1095 DMEM(H)
曲拉通x-100 Sodium 1-hexanesulfonate 9002-93-1
ARB14151 牛血清白蛋白(BSA)含量分析 
四甲基*化铵 Molybdenum disulfide 64-20-0
F020234 山羊抗人γ链抗体 Goat Anti-Human IgG(γ chain)
ARB11066 人转录因子抗体-1(ATF-1)酶标法分析 Human activating transcription factor-1,atf-1 ELISA KIT
ARB14185 小鼠糖皮质激素(GC)酶免分析 
SJ0723 TE缓冲液 PH-8.0
ARB10742 人纤溶酶抗纤溶酶复合物(PAP)ELISA代测服务 Human plasmin-antiplasmin complex,pap ELISA KIT
ARB14201 小鼠3-磷酸甘油醛脱*酶(GAPDH)检测服务 
BL1287 4％多聚甲醛
64485-93-4 噻孢霉素 Cefotaxime,Sodium Salt
四正丁基*化铵 4-Methoxybenzoic acid 1112-67-0
ARB12747 小鼠CA-ATP酶免费代测 Mouse ca-atp ELISA KIT
PY01-010  干酪素  500克  
偶氮脒类引发剂V59 Amprolium hydrochloride 13472-08-*(代"7")
北京DH5α感受态细胞厂家关键词：WE0252,DH5α感受态细胞,DH5α Competent Cell


·FITC标记兔抗人IgG(H+L)
编号：WE0359
英文名称：Rabbit Anti-Human IgG, FITC Conjugated
规格：100μl
本产品为FITC(硫*酸荧光素)标记的经亲和纯化的兔抗体，特异识别人IgG重链和轻链，其检测灵敏度高，本底低。荧光素标记抗体广泛应用于免疫学、细胞化学、流式细胞分析等研究，在临床检验上也用于细菌、病毒和寄生虫的检验及自身免疫病的诊断等。

免疫原：人IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：FITC，Amax=492; Emax=520
应用范围：对于大多数实验(1：50-200)

·HRP标记抗V5标签单克隆抗体
编号：WE0334
英文名称：HRP Conjugated Anti V5-Tag Mouse Monoclonal Antibody
规格：20μl|100μl
本抗体为经辣根过氧化物酶(HRP)直接标记的抗V5标签鼠单克隆抗体，可用于检测V5-Tag(GKPIPNPLLGLDST)融合蛋白。本产品经HRP直接标记，无需使用二抗，可直接用相应酶底物显色或化学发光法检测目的蛋白，减化了实验步骤，避免由二抗交叉反应引起的非特异性条带。

抗体类型：鼠IgG
免疫原：人工合成多肽
标记物：HRP
应用范围：WB(1：500-3000)、ELISA(1：1000-20000)

·TBST(pH8.0,10×)
编号：WE0310
英文名称：HRP Conjugated Anti V5-Tag Mouse Monoclonal Antibody
规格：500ml
本抗体为经辣根过氧化物酶(HRP)直接标记的抗V5标签鼠单克隆抗体，可用于检测V5-Tag(GKPIPNPLLGLDST)融合蛋白。本产品经HRP直接标记，无需使用二抗，可直接用相应酶底物显色或化学发光法检测目的蛋白，减化了实验步骤，避免由二抗交叉反应引起的非特异性条带。

抗体类型：鼠IgG
免疫原：人工合成多肽
标记物：HRP
应用范围：WB(1：500-3000)、ELISA(1：1000-20000)

·一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(高含量ROX校正染料)
编号：WE0139
英文名称：SuperSYBR One Step RT-qPCR Kit(High ROX)
规格：100次
  本试剂盒是一步法Real-Time RT-qPCR专用试剂盒。所含的SYBR Green I荧光染料可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可以用于多种不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应，逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。全新高效逆转录酶RNase H活性缺失，减少了逆转录反应中RNA的降解。该酶逆转录效率高，可对少量 RNA模板进行良好的逆转录反应。与RNA亲合性高，能通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。全新高效热启动酶，在常温下酶的活性被封闭，从而有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，极大提高了荧光定量PCR反应的精确性。所包含的缓冲系统使以上两种酶同时发挥最大功效，提高效率。本产品灵敏度高，特异性高，线性范围广，对目的基因定量更准确。

ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。

不需要ROX校正的仪器:(WE0137)
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器：(WE0138)
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器：(WE0139)
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

试剂盒组成：

组份	WE0137-100次	WE0138-100次	WE0139-100次
2×SuperSYBR One Step Buffer	1.4ml	1.4ml	1.4ml
SuperSYBR One Step EnzymeMix	50μl	50μl	50μl
50×Low ROX	-	50μl	-
50×High ROX	-	-	50μl
RNase-Free Water	1.5ml	1.5ml	1.5ml

注意事项：
1、本试剂盒中的各试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品以RNA为模板进行一步法RT-PCR实验，在操作过程中应避免RNase污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，实验相关耗材应用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并高压灭菌30分钟后使用。
3、SuperSYBR One Step RT-qPCR Buffer中含有SYBR Green I 荧光染料，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
4、本试剂盒中的各试剂应避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
5、本试剂盒必须使用特异性引物，引物的选择可根据具体实验来选择，引物设计的好坏直接影响到RT-PCR反应的结果，设计引物时需考虑GC含量，引物长度，引物位置，PCR产物的二级结构等因素，建议采用专业的引物设计软件进行设计。
6、本品不能用于探针法荧光定量PCR。

操作步骤：
1、将RNA模板、引物、2×SuperSYBR One Step Buffer、SuperSYBR One Step EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、PCR反应体系
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
2×SuperSYBR One Step Buffer	12.5μl	1×
Forward Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
SuperSYBR One Step EnzymeMix	0.5μl
RNA Template	Xμl	10 pg～100ng
50×Low ROX or High ROX(optional)	0.5μl	1×
RNase-Free Water	up to 25μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以终浓度0.1-0.5μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX。

3、涡旋震荡混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。
4、RT-qPCR反应条件(荧光定量PCR为两步法)，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为例。
 

步骤	温度	时间	循环数
反转录	45℃	10 min
PCR预变性	95℃	5 min
变性	95℃	10 s	30-40个循环
退火/延伸	60℃	45 s
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)建议采用两步法PCR反应程序，若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考；若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增。
2)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI7500荧光定量PCR仪为参照设定。

RT-qPCR反应条件(荧光定量PCR为三步法)：
 

步骤	温度	时间	循环数
反转录	45℃	10min
PCR预变性	95℃	5min
变性	95℃	15s	30-40 个循环
退火	56℃-64℃	30s
延伸	72℃	30s
融解曲线分析	95℃	15s
	60℃	1min
	95℃	15s
	60℃	15s

注意：
1)三步法PCR扩增时，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
2)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

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