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-80℃
- 保质期:
长期
- 库存:
966
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
6×0.2 ml
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销售T7 表达晶体 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )优惠价,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
T7 表达晶体 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )优惠价
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
编号:C3022I
规格:6×0.2 ml
优点:
晶体学研究与 SeMet 标记的理想选择
BL21 源增强型菌株
无动物来源产品
概述:
T7 表达晶体 E. coli 感受态细胞适用于高效转化和蛋白表达,专用于 x 射线结晶学研究。非常适合于对蛋白进行硒代蛋氨酸标记(蛋氨酸营养缺陷型)。
基因型:
fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm] R(zgb-210::
Tn10--TetS) endA1 metB1 D(mcrC-mrr)114::IS10
特性:
• T7 表达的衍生物,T7 RNA 聚合酶位于染色体上并受 lac 调控
• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失
转化效率:
高效级:0.6–1 x 109 cfu/μg pUC19 DNA
抗性:
T1 噬菌体(fhuA2)、呋喃妥因
敏感性:
氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素
关于T7 表达晶体 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )优惠价的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
·SspI限制性内切酶
编号:R0132L
规格:5KU|5KU|1KU
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 50%
BalbBuffer 2.1: 100%
BalbBuffer 3.1: 50%
CutSmart Buffer: 50%
特性:
重组酶、省时酶。
反应条件:
Sspl 反应缓冲液,37℃。
热失活:65℃ 20 分钟。
浓度:
5,000和25,000units/ml。
甲基化敏感性:
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。
·抗 CBD 单克隆抗体
编号:E8034S
规格:0.05ml
特性:
单柱纯化且无需使用蛋白酶
目的蛋白质不含来自载体的氨基酸
可融合到目的蛋白的 N 端或 C 端
重组蛋白的连接或标记
可分离有或无 N 端甲硫氨酸的蛋白
关于产品详细描述和 pTXB1 和 pTYB21 载体图谱,包括 MCS(多克隆酶切位点),请见目录 355-356 页。载体序列文件请联系我们咨询 查询。
概述:
IMPACT(Intein Mediated Purificaiton with an Affinity Chitin-binding Tag)试剂盒利用经改良过的蛋白剪接元件(内含肽)进行一步亲和纯化重组蛋白(图1)。该系统与其它蛋白融合表达系统的主要区别在于:无需蛋白酶作用,即可将重组蛋白与其亲和标签(Tag)分离。
IMPACT 试剂盒能够融合表达含有内含肽及几丁质结合结构域(CBD)的蛋白,融合标签可以融合到目标蛋白的 C 端(pTXB1)或 N 端(pTYB21)(图 2)。在硫醇试剂(如 DTT)的参与下,内含肽进行特异性的自我剪切,释放出目的蛋白。pTXB1 载体还可用于表达和纯化 C 端含硫脂键的蛋白,并用于内含肽介导的蛋白连接(IPL,图 3)。IPL 反应,即表达蛋白连接,可通过一种天然肽键将 N 端为半胱氨酸的多肽或蛋白和一段细菌表达出的 C 端硫脂键蛋白连接起来,此反应可用于蛋白标记或半合成。有关 IMPACT 系统和 IPL 的更多信息请联系我们咨询 查询。
pTYB21 的内含肽标签包含酿酒酵母(Sce)VMA1 内含肽和几丁质结合域融合在目的蛋白的 N 末端。
pTXB1 是大肠杆菌表达载体,携带有一个小的蛋白自剪切元件即来自 Mycobacterium xenopi gyrA 基因的 mini 内含肽[Mxe GyrA 内含肽,22 kDa]。蛋白自剪切元件经修饰后与来自芽孢杆菌(Bacillus circulans)的几丁质结合域(CBD)一起共同形成一个内含肽标签。该标签可与几丁质珠(S6651)结合。使用硫醇试剂(如 DTT)或 MESNA(2-mercaptoethanesulfonic acid)(后续连接用)诱导内含肽自我剪切并释放出目的蛋白。
iMPACT 试剂盒组成l
– 大肠杆菌表达载体:pTXB1、pTYB21 和 pMXB10 对照载体
– 几丁质珠:纯化融合蛋白的亲和基质(结合容量 = 2 mg/ml)
– 抗 CBD 单克隆抗体
– DTT 与 SDS 上样缓冲液
T7 表达晶体 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )优惠价关键词:T7 表达晶体 E. coli 感受态细胞 ,C3022I, 高效级
·SmaI限制性内切酶
编号:R0141L
规格:10KU|2KU|1KU
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: <10%
BalbBuffer 2.1: <10%
BalbBuffer 3.1: <10%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液,25℃。
热失活:65℃ 20 分钟。
浓度:
20,000units/ml。
37℃ 时活性:
50%(半衰期为 15 分钟)。
甲基化敏感性:
对哺乳动物基因组DNA CpG甲基化敏感。
注意事项:
Smal是Xmal的不完全同裂酶。Smal 产生平末端,Xmal产生5´ 突出末端。
·XhoI RE-Mix限制性内切酶
编号:R5146S
规格:200次
特性:
预混液、重组酶、省时酶。
反应条件:
20 μl反应体系中加入 Xhol RE-Mix和DNA,37℃ 温育。
热失活:80℃ 20 分钟。
甲基化敏感性:
对哺乳动物基因组DNA CpG甲基化敏感。
注意事项:
Xhol是PaeR7l的完全同裂酶。
·HinP1I限制性内切酶
编号:R0124L
规格:10KU|2KU|1KU
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 100%
BalbBuffer 2.1: 100%
BalbBuffer 3.1: 100%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液,37℃。
热失活:65℃ 20 分钟。
浓度:
10,000units/ml。
甲基化敏感性:
对哺乳动物基因组DNA CpG甲基化敏感。
注意事项:
HinP1l是Hhal的不完全同裂酶。HinP1l 产生一个 5´突出端,而 HhaI 产生一个 3´突出端。该 5´突出端可以有效地连入 M13和pUC 载体的 Accl 位点。
T7 表达晶体 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )优惠价关键词:T7 表达晶体 E. coli 感受态细胞 ,C3022I, 高效级
·96 孔微孔板磁性分离架
编号:S1511S
规格:96 孔微孔板
概述:
磁性分离架是专为使用磁珠进行少量分离而设计的产品。磁体位于分离架侧壁,可减少移液过程中样本的损失。
磁体:
钕永磁材料。
尺寸:
6-管磁力架 (3" x 2" x 1¾"), 12-管磁力架 (5½" x 2" x 1¾"), 50 ml 磁力架 (3½" x 4¼" x 3½") 和 96 孔微孔板磁性分离架 (5½" x 1¼" x 3¾")。
·BaeGI限制性内切酶
编号:R0708L
规格:2500U|500U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 75%
BalbBuffer 2.1: 75%
BalbBuffer 3.1: 100%
CutSmart Buffer: 25%
特性:
重组酶、省时酶。
反应条件:
BalbBuffer 3.1,37℃。
热失活:80℃ 20 分钟。
浓度:
10,000units/ml。
甲基化敏感性:
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。
注意事项:
BaeGI是Bme1580I的完全同裂酶。
·NdeI限制性内切酶
编号:R0111L
规格:20KU|4KU|2KU
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 75%
BalbBuffer 2.1: 100%
BalbBuffer 3.1: 100%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液,37℃。
热失活:65℃ 20 分钟。
浓度:
20,000units/ml。
甲基化敏感性:
对 dam、dcm 和哺乳动物 DNA CpG 甲基化均不敏感。
注意事项:
对标准小量制备的 DNA 切割率较低。
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文献和实验。这提示即使很弱的RBS,如果与核糖体结合也能非常有效。这种调节机制有可能在蛋白质超量生产生物技术中发挥重要作用。事实上,翻译偶联已经被广泛用于不同基因的高效表达。 除了SD区与16S rRNA结合之外,mRNA和核糖体的其他相互作用也参与翻译的起始。如核糖体S1蛋白直接参与30S亚基对mRNA的识别和结合[101]。2.翻译增强子 已经在细菌和噬菌体中鉴定了一些在E.coli中显著增强异源基因表达的序列。Olins等从T7噬菌体基因10前导序列(g10-L)中鉴定了一9bp的序列,该序列似乎
的衍生物,不携带有些野生分离株含有的EcoRI或其它II型限制系统。 注意: 已证实,克隆实验中mcr 和mrr 位点可减少哺乳动物(8,9,11,14)和植物(9,15)甲基化序列的回收量。一般说来,从含有甲胞嘧啶有机体中克隆基因组DNA时,明智之举是使用无Mcr 和Mrr系统的菌种[如NEB 10-beta 感受态细胞(NEB #C3019)、NEB表达感受态细胞(NEB #C2523)或者T7 表达感受态细胞(NEB #C2566)]。这些有机体包括所有哺乳动物和高等植物,以及许多原核
浮于200ul 0.1MCaCl2中, 冰浴30min 建议用TSS法,简单方便,比氯化钙法的转化效率高.别的菌可能不一定适用。 方法五 E.coli感受态细胞制备方法: 单菌落平板至2ml LB, 37℃ 250 r/m, 1ml 转至50 ml LB, 37oC 250 r/m至 A600=0.2-0.4 离心后用10毫升TSS重悬后,分装 -70oC保存。尽量冰上操作. 转化: 加质粒( TSS: 7.0ml pH6.1 LB 2.0ml 50% PEG
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