北京BaldStar TaqMan Mixture(dUTP

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名称：北京BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)(低含量ROX校正染料)价格
英文名：BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG)(Low ROX)
编号：WE0155
规格：5ml
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
  本品是专用于探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含 BaldStar Taq DNA polymerase、PCR Buffer、dNTPs(dTTP全部被dUTP所取代)、UNG酶和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列的检测，如基因表达分析，拷贝数分析，SNP基因型分析等。本产品中运用了dUTP-UNG防污染系统，在PCR反应体系配制过程中加入了dUTP，因此就形成了含有dU碱基的扩增产物。而此产物可以在下次进行PCR反应前，由PCR体系中的UNG酶处理消除。这样就有效的去除了PCR产物的残留污染，大大降低了由于扩增产物污染而导致的假阳性。UNG酶在PCR循环中的预变性步骤即可被灭活，因此不会影响新的含dU碱基PCR产物的形成。本品含有的 BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的 PCR缓冲体系与热启动酶的组合，显著提高了PCR的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，可以检测单拷贝的模板。使用本产品可以得到更广的线性范围，对目的基因定量更准确。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0154)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0155)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0156)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

产品组成：

 

组份	WE0154-5ml	WE0155-5ml	WE0156-5ml
2×BaldStar TaqMan Mixture(UNG)	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。


使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaldStar TaqMan Mixture(UNG)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Probe，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。

2、PCR反应程序
注意！本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！

两步法PCR：

步骤	温度	时间	循环数
UNG酶消化	37℃/50℃	2-10 min
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火/延伸	60℃	1 min

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增。

三步法PCR：

步骤	温度	时间	循环数
UNG酶消化	37℃/50℃	2-10 min
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火	55℃-65℃	30s
延伸	72℃	30s

储存条件：-20℃，避免反复冻融

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·DNase I(不含RNase)
编号：WE0213
英文名称：DNase I(RNase Free)
规格：1000U
  DNase I是一种需二价阳离子的脱氧核糖核酸内切酶，可用于降解单链或双链DNA。其原理为DNase Ⅰ水解磷酸二酯键产生带有5"-磷酸基团和3"-OH的单核苷酸或寡核苷酸。Mg2+或Mn2+都可以激活DNase I的活性，而Ca2+浓度直接影响酶的活性。Mg2+存在时可在双链DNA的每条单链上随机地产生切口；而在 Mn2+存在下可使双链DNA断裂，使DNA片段化。用于无DNA污染的RNA的制备，逆转录及体外转录等实验。

产品组成：

组份	1000U
DNaseⅠ(RNase Free),1 U/μl	1ml
Reaction Buffer(with MgCl2),10×	1ml
200 mM EDTA	1ml

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、因为DNase I 经常用于需要保持RNA完整性的DNA消化实验，所以在酶制备过程中最大限度的避免了RNase污染，可以安全地用于RNA的提取，但由于该酶中不含RNase 抑制剂，提醒使用时注意防止外源RNase的污染。
2、DNase I受剪切力的影响比较大，使用前可以将离心管上下颠倒混匀，避免涡旋震荡。
3、每处理1μg RNA，DNase I用量不要超过1U。

使用说明：
1、以制备用于RT-PCR的RNA样品为例，配置10μl反应体系，如下表：

组分	体积	终浓度
RNA	Xμl	1μg
Reation Buffer(with MgCl2)，10×	1μl	1×
DNaseⅠ(RNase Free)	1μl	1 U
RNase Free Water	Yμl	补足至10μl

2、37℃孵育30分钟。
3、加入1μl 200 mM EDTA，65℃孵育10分钟，使DNase Ⅰ失活，终止反应。
4、处理后的RNA可用于RT-PCR。

储存条件：室温(15～30℃)

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