北京实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ)哪里

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北京实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ)哪里卖由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ)等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。

名称：北京实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ)哪里卖
规格：5ml
产地：国产|进口
编号：WE0140
品牌：百奥莱博
英文名：BaReSYBR Mixture
  本品是专用于染料法(SYBR GreenⅠ)实时荧光定量PCR的预混体系， 浓度为2×， 包含HotStar Bes Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列的检测。本品中所含的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可以用于多种不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。经独特方法处理的热启动DNA聚合酶和专门的PCR缓冲液使本品具有特异性高的特点，满足常规荧光定量检测。该产品应用范围广，适用于无需ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪。

产品组成：

 

组份	5ml
2×BaReSYBR Mixture	5×1ml
ddH2O	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
3、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
4、本品不能用于探针法荧光定量PCR。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应程序，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系：
 

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaReSYBR Mixture	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。

2、PCR反应程序：
两步法PCR：
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	5 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火/延伸	60℃	1 min
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本产品所采用的热启动酶需在预变性95℃、5 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考；若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
3)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

想要了解更多关于北京实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ)哪里卖的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息，请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品：

·Cy3标记山羊抗兔IgG(H+L)
编号：WE0381
英文名称：Goat Anti-Rabbit IgG, Cy3 Conjugated
规格：100μl
本产品为Cy3标记的经抗原亲和纯化的山羊抗体，特异识别兔IgG，可以与TRITC使用相同的滤光片。使用本产品检测灵敏度高，本底低，对其他种属IgG无明显交叉反应，常用于免疫荧光和流式细胞等标记检测。

免疫原：兔IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：Cy3 bis-NHS ester，Amax=550; Emax=570
应用范围：对于大多数实验(1：50-400)

·抗c-Myc标签多克隆抗体
编号：WE0348
英文名称：Anti c-Myc Rabbit Polyclonal Antibody
规格：100μl
该抗体可高度特异识别重组蛋白C末端或N末端的c-Myc标签(EQKLISEEDL)，而不受邻近*基酸组成的影响，可用于检测各种表达载体表达的c-Myc-Tag融合蛋白。

抗体类型：亲和纯化兔多克隆抗体IgG
免疫原：人工合成多肽
应用范围：WB(1：1000-5000)、ELISA(1：500-10000)

·高效无内毒素质粒大量提取试剂盒
编号：WE0167
英文名称：NoEndo Plasmid Maxi Kit
规格：2次|10次
  本试剂盒提供一种简单快捷高效提取无内毒素质粒的新方法，在碱裂解法裂解细胞的基础上，采用独特的硅基质膜吸附技术，高效专一结合质粒DNA；同时采用特殊的缓冲液系统和除内毒素过滤器，有效去除内毒素、基因组DNA、RNA、蛋白等杂质。本试剂盒所得质粒纯度高、提取量大，特别适用于细胞转染，同时也可用于DNA测序，PCR，体外转录，内切酶消化等实验。

  为什么使用本试剂盒？：内毒素是质粒提取中常见的污染物，由于真核细胞对内毒素非常敏感，因此，如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。

试剂盒组成：

组份	2次	10次
Buffer P1	30ml	125ml
Buffer P2	30ml	125ml
Buffer E3	30ml	125ml
Buffer PS	15ml	30ml
Buffer PW(浓缩液)	10ml	50ml
Endo-Free Buffer EB	10ml	30ml
RNase A(10 mg/ml)	600μl	2ml
推柄	2个	10个
内毒素过滤器FQ	2个	10个
吸附柱DQ及收集管	2套	10套
离心管(50ml)	2个	10个

自备试剂：无水乙醇、异丙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，将吸附柱置于2～8℃可保存更长时间，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可稳定保存6个月。
2、Buffer P1 在使用前先加入RNase A(将试剂盒中提供的RNase A 全部加入)，混匀，置于2–8℃保存。使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请先检查Buffer P2 和Buffer E3是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
5、注意Buffer P2和Buffer E3含有刺激性物质，请戴手套操作，使用后应立即盖紧盖子。
6、使用Buffer PS处理过的吸附柱最好立即使用，避免放置时间过长影响使用效果。
7、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。

操作步骤：
1、取150ml过夜培养的菌液，加入离心管(自备)中，12000×g离心2-3分钟收集细菌，尽量吸弃全部上清。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入12ml Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮细菌沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，使提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入12ml Buffer P2，温和地上下颠倒混匀8-10次，使菌体充分裂解，室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮，提示可能菌量过大，裂解不彻底，应减少菌体量。
4、向离心管中加入12ml Buffer E3，立即上下颠倒混匀8-10次，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5分钟。12000×g离心10分钟，将上清全部倒入除内毒素过滤器中，慢慢推动推柄(Plungers)过滤，滤液收集在干净的50ml离心管(自备)中。
注意：Buffer E3 加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
5、向滤液中加入0.3倍滤液体积的异丙醇，上下颠倒混匀。
注意：加入异丙醇过多容易导致RNA污染。
6、柱平衡：向已装入收集管中的吸附柱中加入2ml Buffer PS，12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、将步骤5中滤液与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱(已装入收集管)中。
8、6000-12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：吸附柱的最大容积为15ml，所以第7步中所得溶液分多次过柱。如果离心机转子倾角较大时，建议加入吸附柱的溶液体积不超过10ml，以防发生漏液现象。
9、向吸附柱中加入10ml Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，6000-12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液。
10、重复步骤9。
11、将吸附柱重新放回收集管中，12000×g离心5分钟，倒掉废液，将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附膜的中间部位加入1-3ml Endo-Free BufferEB，室温放置2-5分钟，12000×g离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意：
1)为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5分钟，12000×g离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。
2)质粒拷贝数较低或>10 kb时，Endo-Free Buffer EB在65－70℃水浴预热，可以增加提取效率。

储存条件：室温(15～30℃)


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·PBS(pH7.5,10×)
编号：WE0312
规格：500ml

·细菌基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0178
英文名称：Bacteria Genomic DNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒适用于从革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌中提取高纯度总DNA，也适用于真菌等样本。本试剂盒每次可处理106-108个细胞，获得多至20μg总DNA。纯化过程中不需*酚或*仿等有毒溶剂，无需乙醇沉淀，一小时内即可获得高纯度DNA。本试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异的结合到硅基质离心吸附柱上，而其他污染物可流过膜，PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25 mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
吸附柱DM及收集管	50套

产品特点：
1、适用于从革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌等样品中分离纯化基因组DNA。
2、无需使用有机溶剂，彻底去除污染物以及下游反应抑制物，快速提取高品质DNA。

自备试剂：无水乙醇；提取革兰氏阳性菌需自备Enzymatic Lysis Buffer。
Enzymatic Lysis Buffer配制方法：20 mM Tris，pH8.0；2 mM Na2-EDTA，pH8.0；1.2% Triton X-100。121℃灭菌处理20分钟，加入适量的Lysozyme(溶菌酶)其终浓度为20mg/ml。详细配制方法可登录百奥莱博网站，搜索WE0178S产品查询。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3、如果提取次生代谢产物大量积累或细胞壁厚的细菌培养物的基因组，建议在对数生长期早期收集样品。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀出现，请将Buffer GL和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解。
6、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GL前加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。
7、如果提取样品为革兰氏阳性菌，需客户自行配制Enzymatic Lysis Buffer处理菌体，其中需使用浓度为20 mg/ml的Lysozyme(溶菌酶)，Lysozyme本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0214S。

操作步骤：

一、革兰氏阴性菌基因组DNA的提取：
1、取细菌培养物1-5ml(106-108个细胞，最多不超过2×109个细胞)置于离心管(自备)中，12000rpm(~～13400×g)离心1分钟，尽量吸净上清。
2、向沉淀中加入180μl Buffer GTL，振荡使菌体重悬。
3、加入20μl 蛋白酶K ，涡旋混匀，56℃孵育，直至溶液变清亮，孵育过程中每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样本分散。
注意：如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
4、加入200μl Buffer GL，涡旋震荡充分混匀。加200μl无水乙醇，涡旋震荡充分混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)如果多个样品一起操作，Buffer GL和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入，震荡混匀。
2)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
5、将步骤4所得溶液(包括形成的沉淀)全部加入到已装入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7。
8、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
9、将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤9所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤9；若洗脱体积小于200μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μlBuffer GE或灭菌水洗脱。
5)保存在水中的DNA会受到酸性水解作用影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

二、革兰氏阳性菌基因组DNA的提取：
1、取细菌培养物1-5ml(106-108个细胞，最多不超过2×109个细胞)置于离心管(自备)中，12000rpm(～13400×g)离心1分钟，尽量吸净上清。
2、加入180μl Enzymatic Lysis Buffer(自备)使菌体重悬。Enzymatic Lysis Buffer配制方法见说明书前部分自备试剂。
3、37℃孵育30分钟。
4、加入20μl 蛋白酶K 涡旋震荡，充分混匀。加入200μl Buffer GL，涡旋震荡混匀。
注意：不要把蛋白酶K 直接加到Buffer GL中。
5、56℃孵育30分钟。
注意：
1)如果需要，95℃孵育15分钟可以使病原体失活，但是95℃孵育会造成一些DNA的降解。
2)如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μl浓度为100 mg/ml的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
6、加入200μl无水乙醇，涡旋震荡充分混匀。
注意：加入无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
7、将步骤6所得溶液(包括形成的沉淀)全部加入到已装入收集管的吸附柱，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤9。
10、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
11、将吸附柱置于一个新离心管(自备)中，向吸附柱中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤11所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤11；若洗脱体积小于200μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)保存在水中的DNA会受到酸性水解作用影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。


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L-谷*酸*盐 Microcosmic salt tetrahydrate 6382-01-0

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