一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒厂家在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒厂家
编号：WE0137
产地：国产|进口
英文名：SuperSYBR One Step RT-qPCR Kit
品牌：百奥莱博
  本试剂盒是一步法Real-Time RT-qPCR专用试剂盒。所含的SYBR Green I荧光染料可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可以用于多种不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应，逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。全新高效逆转录酶RNase H活性缺失，减少了逆转录反应中RNA的降解。该酶逆转录效率高，可对少量 RNA模板进行良好的逆转录反应。与RNA亲合性高，能通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。全新高效热启动酶，在常温下酶的活性被封闭，从而有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，极大提高了荧光定量PCR反应的精确性。所包含的缓冲系统使以上两种酶同时发挥最大功效，提高效率。本产品灵敏度高，特异性高，线性范围广，对目的基因定量更准确。

ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。

不需要ROX校正的仪器:(WE0137)
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器：(WE0138)
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器：(WE0139)
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

试剂盒组成：

 

组份	WE0137-100次	WE0138-100次	WE0139-100次
2×SuperSYBR One Step Buffer	1.4ml	1.4ml	1.4ml
SuperSYBR One Step EnzymeMix	50μl	50μl	50μl
50×Low ROX	-	50μl	-
50×High ROX	-	-	50μl
RNase-Free Water	1.5ml	1.5ml	1.5ml

注意事项：
1、本试剂盒中的各试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品以RNA为模板进行一步法RT-PCR实验，在操作过程中应避免RNase污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，实验相关耗材应用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并高压灭菌30分钟后使用。
3、SuperSYBR One Step RT-qPCR Buffer中含有SYBR Green I 荧光染料，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
4、本试剂盒中的各试剂应避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
5、本试剂盒必须使用特异性引物，引物的选择可根据具体实验来选择，引物设计的好坏直接影响到RT-PCR反应的结果，设计引物时需考虑GC含量，引物长度，引物位置，PCR产物的二级结构等因素，建议采用专业的引物设计软件进行设计。
6、本品不能用于探针法荧光定量PCR。

操作步骤：
1、将RNA模板、引物、2×SuperSYBR One Step Buffer、SuperSYBR One Step EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、PCR反应体系
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
2×SuperSYBR One Step Buffer	12.5μl	1×
Forward Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
SuperSYBR One Step EnzymeMix	0.5μl
RNA Template	Xμl	10 pg～100ng
50×Low ROX or High ROX(optional)	0.5μl	1×
RNase-Free Water	up to 25μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以终浓度0.1-0.5μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX。

3、涡旋震荡混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。
4、RT-qPCR反应条件(荧光定量PCR为两步法)，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为例。
 

步骤	温度	时间	循环数
反转录	45℃	10 min
PCR预变性	95℃	5 min
变性	95℃	10 s	30-40个循环
退火/延伸	60℃	45 s
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)建议采用两步法PCR反应程序，若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考；若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增。
2)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI7500荧光定量PCR仪为参照设定。

RT-qPCR反应条件(荧光定量PCR为三步法)：
 

步骤	温度	时间	循环数
反转录	45℃	10min
PCR预变性	95℃	5min
变性	95℃	15s	30-40 个循环
退火	56℃-64℃	30s
延伸	72℃	30s
融解曲线分析	95℃	15s
	60℃	1min
	95℃	15s
	60℃	15s

注意：
1)三步法PCR扩增时，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
2)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

欲咨询购买一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒厂家，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：
ARB12085 大鼠水通道蛋白1(AQP-1)定量分析 Rat aquaporin 1,aqp-1 ELISA KIT
五肽胃泌素 Hot Taq DNA Polymerase 5534-95-2
硫*(代"酸")* Piperacillin sodiu*(代"m") salt 7778-80-5
12650-88-3 Lysozyme   溶菌酶
BTN130806 胚胎裂解液 Embryonic Cell Lysis Solution
BFD067 牛布病抗体检测卡
草酸酰胺乙酯 L-Sorbose 617-36-7
F040308 小鼠IgG2a抗原 Mouse IgG2a
ARB10450 人四型胶原(Ⅳ-C)ELISA代测服务 Human collagen Ⅳ (Ⅳ-C) ELISA KIT
ARB12636 大鼠雄烯二酮(ASD)代做ELISA实验 Rat androstenedione,asd ELISA KIT
BL0871 羊抗牛IgG免疫血清
H1201 驴血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
ARB11774 人解整合素样金属蛋白酶10(ADAM10)Elisa分析 Human a disintegrin and metalloprotease 10,adam10 ELISA KIT
BL0844 羊抗小鼠IgG纯化抗体
52-90-4 L-Cysteine  L-半胱*酸
PY01-014-2  酵母膏(酵母浸膏)  发酵级  1公斤  
一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒厂家关键词：SuperSYBR One Step RT-qPCR Kit,一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒,WE0137

嗜热菌蛋白酶 Taurine 9073-78-3
BFD017 小反刍兽疫抗体检测试剂盒（最新产品）
ARB11959 大鼠Apelin 12(AP12)免费代测 Rat apelin 12,ap12 ELISA KIT
F050310 小鼠IgG3抗体 Mouse IgG3
BTN130545 膦酰二肽溶液 Phosphoramidon Solution
BTN130627 核酸外切酶T Exonulease T
ARB10952 人肝细胞生长因子(HGF)含量测试 Human hepatocyte growth factor,hgf ELISA KIT
ARB10821 人抗麦胶蛋白(AGA)elisa检测 Human anti-gliadin antibody,aga ELISA KIT
PY02-303  5%乳糖发酵管培养基  250克  
ARB11944 大鼠8异前列腺素(8-Iso-PG)血清中含量检测 Rat 8-iso prostaglandin,8-iso-pg ELISA KIT
BTN130827 小RNA克隆试剂盒 Small RNA Cloning Kit
DL-高半胱*酸硫*(代"酸")内酯盐*(代"酸")盐 Light green SF yellowish 6038-19-3
SJ0855 猪血清
BL0866 羊抗人纤维蛋白原免疫血清 0.5ml
一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒厂家关键词：SuperSYBR One Step RT-qPCR Kit,一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒,WE0137

BTN130822 苏木素染色液 Hematoxylin Staining Solution
ARB13540 兔子Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)含量测试 Rabbit n-terminal procollagen Ⅲ proPeptide,pⅢnp ELISA KIT
ARB12441 大鼠骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)检测服务 Rat bone-specific alkphase b,alp-b ELISA KIT
PY08-027  FRASER增菌液 10ml  10支/盒，用于李斯特氏菌的选择性分离培养
BTN60501 一管式拭子DNAOUT One-Tube Swab DNAOUT
ARB10358 人心纳素(ANF)ELISA检测服务 Human atrial natriuretic factor,anf ELISA KIT
ARB13696 兔吡*(代"啶")交联物(PY)elisa检测操作说明书 Rabbit pyridinium crosslink/pyrilinks,py ELISA KIT
HC0281 八道整支灭菌移液器
BTN120692 硫*(代"酸")庆大霉素溶液 Gentamycin Sulfate Solution
BL0788 兔IgG抗原(干粉)
BL0112 10000*gelgreen核酸染料
BL1284 1×PBST,PH7.2-7.4,0.01M,液体
ARB13477 鸡转化生长因子β2(TGF-β2)血清中含量检测 Chicken transforming growth factor β2,tgf-β2 ELISA KIT

我公司生产供应销*(代"售")的核酸扩增(PCR)产品正全系列现货促销，满分期待您的垂询选购一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒厂家。