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文献和实验Antibody Dilution Buffers Primary Antibody Dilution Buffer: 1%BSA (stabilizer and blocking) 0.1% cold fish skin gelatin (blocking)
那么如何通过改变抗体稀释液的配方,寻求抗体孵育的最佳条件呢?首先要认清,抗体稀释液没有一个绝对通用的配方;一种抗体一个脾气。其次,抗体稀释液的配方要兼顾与特异性抗体竞争抗原的强度,以及对其他区域的封闭强度两方面的平衡。目前,抗体稀释液中可以充当封闭蛋白的主要有milk,BSA和gelatin,似乎很少的样子 。。。可是,你有没有考虑过“复方”?--这下配方无限多了吧。1. 采用milk,BSA和gelatin的单方。3% milk,5% BSA,2.很多情况下单方的浓度很高了,背景问题仍不能
浓度和孵育时间。建议一抗反应在 4 ℃最佳,反应温和,但时间最好超过 16~24 h。 9)抗体稀释液 其实许多实验室抗体稀释液就用一般 PBS 即可,但专用的抗体稀释液中除PBS 成份外,还加了叠氮化钠防腐剂、BSA 稳定剂等组份,对抗体的多次回收利用较好。正因为这种原因,我一直用国产的专用抗体稀释液,一段时间在更换新抗体稀释液时实验结果出现了阴性结果(提示可能一抗没有结合),最后从抗体浓度和孵育时间、封闭时间等原因排除后,发现是新抗体稀释液的 PH 值偏酸,而使抗原
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