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HSV溶瘤改造病毒

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  • ￥2000 - 20000
  • 苏州
  • 重组单纯疱疹病毒包装
  • 2026年02月02日
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    • 服务名称：

      HSV溶瘤改造病毒

    • 提供商：

      复百澳生物

    【产品概述】
    HSV-1-F-WT-mCherry 是从人类患者的面部水疱中分离出来的 F 型单纯疱疹病毒，其宿主是人喉表皮样癌细胞（Hep-2）。本产品是在野生型单纯疱疹病毒 1（HSV-1）的基因组两侧的 RL1 和 RL2 之间引入荧光标记基因 mCherry，且 mCherry 基因与RL2 融合表达，感染细胞系（如 Hep-2、神经胶质瘤细胞 U251、非洲绿猴肾细胞 Vero 和非小细胞肺癌细胞 A549 等）后可表达红色荧光蛋白（mCherry）。该病毒可以使用 Vero 细胞进行扩增。
    【预期用途】
    1、抗HSV-1血清中和抗体效价测试；
    2、抗HSV-1单克隆抗体滴度检测；
    3、作为示踪工具用于神经科学等功能性研究，如有效地标记和追踪神经环路。
    【存储条件及有效期】
    置于-75±5℃条件下密封保存，有效期12个月。
    【实验流程（以血清样本为例）】
    1、细胞铺板
    取对数生长期的 293T 细胞进行胰酶消化，计数后制成 1 x 105 cells/mL 细胞悬液，96 孔板每孔接种 100 µL 细胞液，置于 37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养。
    2、感染当天样品准备（细胞密度汇集至40%-60%时）
    a) 血清样品置于56℃水浴锅中灭活30 min-1h；单抗起始浓度调至300μg/ml；
    b) 稀释：使用DMEM培养基对血清样本进行稀释，分别进行系列梯度稀释，作为独立血清样品或单抗样品进行中和抗体检测；
    3、病毒稀释
    从-80℃超低温冰箱中取出HSV-1病毒置于冰上或4℃条件下融化，待其完全融化后短暂离心，使病毒液聚集于保存管底，依据报告中病毒滴度和实验方案设计进行系列稀释（1TCID50=1荧光斑点）；建议96孔板每孔加入4000 TCID50病毒液。
    4、待测样品和病毒稀释液预孵育
    将稀释的待测样品与病毒稀释液进行等体积混合，同时设置细胞对照（DMEM培养基，100 µL/well）、病毒对照（病毒稀释液与DMEM培养基等体积混合），放入37℃、5%CO2 培养箱中孵育1 h；
    5、感染细胞
    孵育结束后各取100 µL混合液（包括细胞对照、病毒对照、实验组）混匀贴壁缓慢加入已经接种好细胞的96孔板对应孔中，贴着工作台面轻轻划“十”字混匀，放入37℃、5%CO2 培养箱中培养72h(感染12h时需补液100ul MEM完全培养基)；
    6、感染检测
    病毒感染细胞72 h后，取出96孔板置于荧光倒置显微镜下观察红色荧光蛋白表达效率，拍照记录。
    检测方法一：使用Elispot荧光斑点计数仪进行检测，计算感染抑制率（%）；
    检测方法二：从孔板中吸弃150 µL上清，加入100 µL室温平衡后的荧光素酶检测试剂，充分吹打混匀后，从每孔中吸取100 µL反应液转移至酶标板中对应孔位，使用酶标仪检测其发光值，注意在20 min内完成检测。（两种检测方法可以只选择一种，依据客户需求设置）。
    【注意事项】
    1) 因细胞水平检测受细胞类型、细胞培养状态、环境条件等影响较大，客户需要根据自身条件确定细胞量、病毒加入量等关键实验参数；建议提前进行预实验，通过预实验计算出合适的病毒使用浓度；
    2) 本产品仅供HSV-1-F-WT-mCherry抗血清或中和抗体滴度体外检测；
    3) 病毒、待测样本避免反复冻融，建议启用后依据实验需求分装储存；
    4) 血清梯度稀释时注意不要产生气泡；
    5) 所有实验操作过程均需要在生物安全柜内进行，实验过程中产生的废弃物均需进行高压灭菌处理；
    6) 病毒为微量体积，使用前请短暂离心后再取样进行操作。

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    该产品被引用文献
    1.Shen Y, Nemunaitis J et al. “Herpes simplex virus 1 (HSV-1) for cancer treatment.” Cancer Gene Ther. 13(11) (2006): 975-92. doi:10.1038/sj.cgt.7700946.
    2.Thomas S, Kuncheria L et al. “Development of a new fusion-enhanced oncolytic immunotherapy platform based on herpes simplexvirus type 1.” J Immunother Cancer.7(1) (2019): 214. doi: 10.1186/s40425-019-0682-1.
    3.Cuchet D, Potel C, et al. “HSV-1 amplicon vectors: a promising and versatile tool for gene delivery.” Expert Opin Biol Ther. 7(7)(2007): 975-95. doi: 10.1517/14712598.7.7.975.
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