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- 中国/美国
- K140
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃保存
- 保质期：
1年
- 英文名：
StarScript II First-strand cDNA Synthesis Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 规格：
ml/盒
【产品概述】
本产品是专为两步法RT-PCR第一步实验设计的高灵敏度RT-PCR反应系统，可以从极低量的总RNA或poly(A) mRNA合成第一链cDNA，并能够通读GC含量高、二级结构复杂的RNA模板。该试剂盒使用重组表达的StarScript II M-MuLV Reverse Transcriptase (RTase)，通过多点定点突变去除了RNase H的活性 (RNase H－)，并增加了该酶与模板－引物之间的亲和力，具有更好的热稳定性，因此其DNA聚合酶的活性和持续合成能力均高于野生型的M-MuLV RTase，合成的cDNA产量更高，长度可达15 kb。本试剂盒含有第一链cDNA合成所需的全部试剂，使用方便，对后续的PCR或定量PCR实验兼容性好，适合于各种耐热DNA聚合酶。
【产品组分】
| StarScript II RTase (200 U/μl) | 20 μl |
| 5×RTase buffer* | 120 μl |
| RNase Inhibitor | 12 μl |
| Oligo (dT)18 (50 μM) | 20 μl |
| Random Primer (50 μM) | 20 μl |
| 10 mMdNTP Mix | 30 μl |
| DEPC-ddH2O | 1 ml |
【保存条件】
-20℃恒温保存一年
【活性定义】
以poly(rA)为模板，oligo(dT)为引物，在37℃条件下，10分钟内催化1 nmol 的dTTP所需要的酶量定义为一个活性单位(U)。
【注意事项】
1. 实验过程中请注意避免RNase污染。
2. 除酶以外的各种试剂，使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度不均影响实验结果。
3. RNA模板的完整性对cDNA合成效率起着决定性作用，因此请选择可靠的RNA提取/纯化方法。建议使用GenStar TRIGene总RNA提取试剂 (货号P118-01) 制备高质量的RNA模板，并设置反转录反应阳性对照。
4. 由于所有的RNA提取方法都不能完全去除基因组DNA，所以应根据后续实验的需求，选择是否需要在反转录反应前去除残留基因组DNA。RNase-free DNase I (货号A216-01) 处理的具体方法见本说明书附录。
5. StarScript II RTase以RNA为模板获得全长的第一链cDNA，其起始位点由所用引物所决定：
1) 随机引物 (Random Primer) 在RNA模板上没有特异性结合位点，所有RNA都可以做为第一链cDNA合成的模板；
2) Oligo dT Primer只能以poly(A) mRNA作为cDNA合成的模板；
3) 采用序列特异性引物 (Gene Specific Primer) 以其结合位点为起始位点。
6. StarScript II RTase合成的第一链cDNA产物可直接加入PCR反应混合物中进行扩增，但加入体积不应超过PCR反应总体系的10%，否则影响目的片段的产量。PCR扩增使用的耐热DNA聚合酶和热循环条件需要根据目的片段的大小、GC含量、引物特性、以及对保真度的要求等进行选择。
7. 第一链cDNA合成产物经过处理后可作为第二链合成的模板，合成含各种标记的cDNA，作为杂交实验的探针。
8. RNA可置于-70℃以下长期保存，cDNA合成产物可置于-20℃保存。
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文献和实验cDNA synthesis using superscript II
SuperScript II 1 µl water 4 µl Prepare this mix as a master mix and add then 20 µl to each reaction. Synthesize the cDNA in a thermocycler: 1.
Protocol for First-strand cDNA Synthesis
℃for 10 minutes and then at 37℃for 60 minutes.Stop the reaction by heating at 70℃for 10 minutes. Chill on ice.NoteThe synthesized cDNA can be amplified by the PCR (see Protocols for PCR using Taq and Pfu DNA Polymerases) without intermediate phenol
of mRNA) or random hexamers; the kit used here contains both kinds); nucleotides for DNA synthesis (dNTPs); MgC2 and buffers required by the enzyme, which are all present in the 5x Reaction Mix. Materials * iScript cDNA Synthesis Kit (BIORAD
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