StarScript II First-strand cDN

StarScript II First-strand cDNA Synthesis Kit

【产品概述】
本产品是专为两步法RT-PCR第一步实验设计的高灵敏度RT-PCR反应系统，可以从极低量的总RNA或poly(A) mRNA合成第一链cDNA，并能够通读GC含量高、二级结构复杂的RNA模板。该试剂盒使用重组表达的StarScript II M-MuLV Reverse Transcriptase (RTase)，通过多点定点突变去除了RNase H的活性 (RNase H^－)，并增加了该酶与模板－引物之间的亲和力，具有更好的热稳定性，因此其DNA聚合酶的活性和持续合成能力均高于野生型的M-MuLV RTase，合成的cDNA产量更高，长度可达15 kb。本试剂盒含有第一链cDNA合成所需的全部试剂，使用方便，对后续的PCR或定量PCR实验兼容性好，适合于各种耐热DNA聚合酶。

【产品组分】
 

StarScript II RTase (200 U/μl)	20 μl
5×RTase buffer*	120 μl
RNase Inhibitor	12 μl
Oligo (dT)18 (50 μM)	20 μl
Random Primer (50 μM)	20 μl
10 mMdNTP Mix	30 μl
DEPC-ddH2O	1 ml

【保存条件】
-20℃恒温保存一年

【活性定义】
以poly(rA)为模板，oligo(dT)为引物，在37℃条件下，10分钟内催化1 nmol 的dTTP所需要的酶量定义为一个活性单位(U)。

【注意事项】

1.     实验过程中请注意避免RNase污染。
2.     除酶以外的各种试剂，使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度不均影响实验结果。
3.     RNA模板的完整性对cDNA合成效率起着决定性作用，因此请选择可靠的RNA提取/纯化方法。建议使用GenStar TRIGene总RNA提取试剂 (货号P118-01) 制备高质量的RNA模板，并设置反转录反应阳性对照。
4.     由于所有的RNA提取方法都不能完全去除基因组DNA，所以应根据后续实验的需求，选择是否需要在反转录反应前去除残留基因组DNA。RNase-free DNase I (货号A216-01) 处理的具体方法见本说明书附录。
5.     StarScript II RTase以RNA为模板获得全长的第一链cDNA，其起始位点由所用引物所决定：
1)     随机引物 (Random Primer) 在RNA模板上没有特异性结合位点，所有RNA都可以做为第一链cDNA合成的模板；
2)     Oligo dT Primer只能以poly(A) mRNA作为cDNA合成的模板；
3)     采用序列特异性引物 (Gene Specific Primer) 以其结合位点为起始位点。
6.     StarScript II RTase合成的第一链cDNA产物可直接加入PCR反应混合物中进行扩增，但加入体积不应超过PCR反应总体系的10%，否则影响目的片段的产量。PCR扩增使用的耐热DNA聚合酶和热循环条件需要根据目的片段的大小、GC含量、引物特性、以及对保真度的要求等进行选择。
7.     第一链cDNA合成产物经过处理后可作为第二链合成的模板，合成含各种标记的cDNA，作为杂交实验的探针。
8.     RNA可置于-70℃以下长期保存，cDNA合成产物可置于-20℃保存。