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- HZbscience
- 中国/上海
- HZ60906-10
- 2025年07月10日
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- 保存条件：
低温运输、-20℃保存
- 保质期：
一年
- 英文名：
1st-Strand cDNA Synthesis Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
上海沪震实业有限公司
- 规格：
10次盒
cDNA第一链合成试剂盒产品及特点
本试剂盒提供合成cDNA第一链所需要的全部试剂。其原理是用莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶（M-MLV RT）高效合成mRNA的全长cDNA拷贝。在基因特异性引物存在条件下，此单链cDNA产物可直接用来进行PCR扩增，或进行其它下游操作，包括合成cDNA第二条链、构建cDNA文库、核酸杂交等。基于Oligo(dT)引物的cDNA合成原理如下：
1. 使用突变的反转录酶，内源RNase H活性低。
2. 最长可合成13 Kb的cDNA。
3. 可以使用oligo-dT、随机引物和RNA专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提供）。
4. 总RNA、poly(A)+RNA或特殊RNA均可作为模板。
5. 可用于cDNA文库构建、RT-PCR、探针标记等。
cDNA第一链合成试剂盒使用及效果
在无菌管中加入1-10 μ L（1 ng-2 μ g）总RNA ，1 μ L引物，加无核酸酶污染水补至13 μL，70℃加热5分钟后立即冰浴，再加入5 uL RT Buffer（含dNTP），37℃保温5分钟。继续向反应液中加入2 μ L M-MLV反转录酶（含RI），反应终体积 为20 μ L。42℃温育1小时。70℃ 保温10分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。反应产物即为cDNA。
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文献和实验M-MLV第一链cDNA合成试剂盒-技术手册一、 试剂盒组成 Components SK2027 SK2028 5×M-MLV Reaction Buffer 100µl
通过体外无细胞系统翻译找出目的基因mRNA以后，变可进行cDNA第一链的合成，其步骤包括： 1）在Ependorf管中加50pmol/L的一种α32PdNTP和1mg/ml的mRNA 10μl（10μg），100m mol/L甲基氢氧化汞1μl，室温反应l0分钟，使RNA变性。 2)加100m mol/L的β-巯基乙醇2μl和10m mol/L RNA酶抑制剂2μl，室温放置5分钟。β-巯基乙醇有稳定逆转录酶活性的作用。 3)向上述反应混合物加lmg／ml
CDNA合成第一链试剂盒 #E6500L 150 个反应 7600 生工 SK2027 10次 MMLV第一链合成试剂盒 SK2028 20次 TAKARA D6135 5次 6800 Active Motif 50096 96rxns ReflectionTM 96
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