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一步法sgRNA 合成试剂盒
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50
3年
上海博尔森生物科技有限公司
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10T /50T
描述:CRISPR/Cas9 是一种由 RNA 指导 Cas 核酸酶对靶向基因进行特定 DNA 修饰的技术,也是细菌和古细菌为应对 噬菌体和外源质粒的攻击而演化来的一种获得性免疫防御机制。此系统的工作原理是通过人工优化的具有引导作用的 sgRNA(Single Guide RNA)引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 sgRNA 配对的靶位点处剪切双链 DNA,引起 DNA 断裂,进而利 用生物体内非同源末端修复机制或同源重组机制修复 DNA,导致基因移码突变、替换或删除,致使基因功能丧失。sgRNA 的体外合成通常有两种策略:一种为构建含特异性序列的转录质粒,另一种则使用合成的 oligo 退火延伸生 成含 T7 转录启动子的双链 DNA 分子,进而再使用 T7 RNA 聚合酶进行体外转录,从而获得 sgRNA。利用合成的 Oligo 直接制备 sgRNA,具有操作简单快速、可实现高通量等优势,已经成为体外合成 sgRNA 的方案。Cas9 的切割是 通过向导 RNA(gRNA)与靶 DNA 形成约 20bp 碱基的配对,且靶序列的 3’端需要有 PAM 结构(NGG),再引导 Cas9 作 用实现的。本试剂盒可通过一步反应获得高纯度、高产量的 sgRNA,仅需要合成一条含有特定靶标序列的 Oligo,可最 短在 4h 内获得 30~50μg 的 sgRNA
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