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文献和实验基固定在树脂上来伸长肽链一样,此方法也有很大的局限性,只在一些特殊情况下有应用。 2.聚酰胺 一般指聚丙酰胺凝胶。最先是由Sheppard等人提出用于多肽合成的 。将二甲基丙烯酰胺(2-1)、N、N`-双丙烯酰乙二胺(2-2)和不对称的二酰胺的衍生单体,如N-丙烯酰-N`叔丁氧羰基- β-丙烯酰-六次甲基二胺(2-3)共聚可得到珠状或无定形的丙烯酰胺载体(2-5a)。其中(2-2)为交联剂,(2-3)则是为了使载体带有可反应的氨基,及一个六碳隔离物链将官能团与聚合物主体分开。 采用聚丙烯酰胺
手把手教你利用 CRISPR-Cas9 系统精准敲除靶标基因
一、CRISPR-Cas 系统简介图 1 CRISPR-Cas9 系统介绍CRISPR-Cas9 系统是一种被广泛运用的基因组编辑工具,它来源于细菌的适应性免疫系统。CRISPR-Cas9 系统包括:Cas9 酶和一个向导 RNA。 向导 RNA 作用是引导 cas9 到基因组的特异性位点上切割。如图 1 所示。目前为止,CRISPR-Cas9 系统主要有两方面应用: 基因敲除和基因敲入。基因敲除时, 一旦 DNA 的双链断裂反应(DSB)被 Cas9 切割诱导发生, 细胞会启动 NHEJ
。 Target 设计 Target 设计:通常情况下我们仅需要在你的目的位置附近找到 NGG(N 代表任意核苷酸),然后找到其紧邻的上游 20 nt 即可(如上图)。 目的位置的选择:我们绝大部分时候的目的是完全 KO 一个基因,其原理是利用移码突变(CRISPR/Cas 系统诱导产生 indel)。所以我们一般选择距离起始密码子 ATG 下游 200bp 范围内的 exon 区域。另外,通常一个基因往往会转录成 2 个以上的 isoforms,所以请选择尽量
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