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- 一基
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- 2025年07月10日
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文献和实验张锋团队再获新进展！Nature 发文解析「超迷你」核酸酶 IsrB 结构及 DNA 切割机制
的开发和改造提供了理论基础。 图片来源：Nature 像 IscB 和 Cas9 一样，IsrB 含有一个 RuvC 样核酸酶结构域，该结构域被桥螺旋结构截断。IsrB 长度仅有约 350 个氨基酸，相比 IscB（Cas9 的祖先）缺少 HNH 核酸酶结构域，同时也缺失 Cas9 的 REC lobe（参与靶标识别）和 PAM 序列互作域。作者推测 IsrB 通过 ωRNA 形成的复杂的三元结构来弥补 REC 的作用。 IsrB 还含有一个 N 端 PLMP 结构域（以其保守的氨基酸基序
。一般地，基因特异的 sgRNA 模板序列为位于 PAM 序列（Protospacer Adjacent Motif）前间区序列邻近基序。这是一种见于 crRNA 分子的短核苷酸基序，可以被 Cas9 蛋白特异性识别并切割的 20 个 nt。 而 PAM 序列的特征为 NGG（其中 N 为任意核苷酸）01 找敲除目的基因的外显子根据目的基因选择待敲除靶基因位点找出敲除目的基因的外显子。 首先在第一个起始密码子 ATG 之后的外显子中找出特异性高的上下游序列。以小鼠基因 Th 为例。在 pubmed
和错误折叠的蛋白。到目前为止，蛋白酶解的机制尚未完全明了，但已有一些策略和方法以减少E.coli中异源蛋白的降解。虽然使得蛋白质不稳定的精确结构特点还不清楚，但是通过系统研究已经明确了一些蛋白不稳定的决定因素。蛋白酶解途径的“N-末端规则”在E.coli中能够发挥作用，即蛋白质的稳定性与其氨基端的残基有关[182]。在E.coli中，Ｎ－末端Arg、Lys、Leu、Phe、Tyr和Trp的半衰期为２分钟，而除脯氨酸外的其他氨基酸的半衰期均超过10小时。有研究表明，在多肽的第二位带有较小侧链的氨基
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