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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
半年
- 英文名:
pESC-Trp
- 库存:
200
- 供应商:
沪震生物
- 规格:
5μg
pESC-Trp
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 产品规格 | 优惠价 |
|---|---|---|---|
| HZ0237 | pESC-Trp | 20μl |
¥请询价 |
使用说明
基本信息
| 启动子: | T7,GAL1,10,TRP1 |
|---|---|
| 复制子: | 2μ ori,ori,FI ori |
| 终止子: | CYC1 |
| 质粒分类: | 酵母系列,酿酒酵母表达载体 |
| 质粒大小: | 6525bp |
| 质粒标签: | C-Flag, C-Myc |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | TRP1 |
| 克隆菌株: | DH5α |
| 培养条件: | 37℃,有氧 LB |
| 表达宿主: | 酵母细胞 |
| 诱导方式: | 半乳糖诱导 |
| 5'测序引物: | GAL1-F: ATTTTCGGTTTGTATTACTTC |
| 3'测序引物: | GALI-R: GTTCTTAATACTAACATAACT |
质粒简介
质粒图谱
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文献和实验Trp平板上,转化效率应该在1 x105 colonies/mg DNA以上。 4.杂交效率不高,该如何处理? 在杂交中,预转化的诱饵细胞的数量可能不够。当对诱饵菌株进行液体培养过夜时,应挑选大的、新鲜的克隆进行培养,经过离心和重悬后,再使用血球计对细胞进行计数。密度应该在1 x109/ml。 一个甚至两个融合蛋白对酵母细胞有毒。你可以通过重组方法来减轻毒性,同时又能保证蛋白的相互作用。或者使用表达水平较低的载体。也可以在琼脂平板或滤膜上进行杂交。但同时必须作杂交对照实验。
喜欢转贴的,请注明来自中国生命科学第一网:丁香园。 根据自己体会和蛋白版的既往精华帖子,总结了没有发现蛋白质表达的原因,或者蛋白质不表达的原因,欢迎大家拍砖。 1.载体构建错误。 这个屡见不鲜,很多克隆新人经常弄错读码框。比如Qiagen的pQE系列载体,其克隆位点常有一两个碱基的区别;另外有些酶产生粘端有些酶产生平端,这些都容易导致读码框错误,从而表达不出来。 2.宿主菌选择不当。不同的宿主菌其基因型是不一样的。有些经过特殊修饰的载体,或者特殊用途的载体,或者有特殊启动
,然后重新检测其是否自激活,但要注意重组也有可能破坏蛋白之间的互作。3.转化效率太低怎么办?可以采用以下方法解决:1)检测一下DNA的纯度,如果可以的话,重新用乙醇纯化。2)DNA-BD/诱饵蛋白很可能是有毒的。3)不适当的培养基,重新配制培养基,并做对照转化。4)检测pGBT9对照载体的转化效率,放置于SD/–Trp平板上,转化效率应该在1 x105 colonies/mg DNA以上。4.杂交效率不高,该如何处理?在杂交中,预转化的诱饵细胞的数量可能不够。当对诱饵菌株进行液体培养过夜时,应挑选
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