| 出品公司: | ZYbscience |
|---|---|
| 载体名称: | pESC-TRP, pESC TRP |
| 质粒类型: | 酿酒酵母蛋白表达载体 |
| 表达水平: | 高拷贝 |
| 诱导方法: | 半乳糖 |
| 启动子: | GAL1和GAL10 |
| 克隆方法: | 多克隆位点，限制性内切酶 |
| 载体大小: | 6525 bp |
| 5' 测序引物及序列: | GAL1-F: ATTTTCGGTTTGTATTACTTC; GAL10-F: GGTGGTAATGCCATGTAATATG |
| 3' 测序引物及序列: | GALI-R: GTTCTTAATACTAACATAACT GAL10-R: GGCAAGGTAGACAAGCCGACAAC |
| 载体标签: | C-Flag, C-Myc |
| 载体抗性: | 氨苄 |
| 筛选标记: | TRP1 |
| 备注: | 利用半乳糖诱导，可以同时使两个基因在酿酒酵母中表达。 |
| 产品目录号: | ZY217453 |
| 稳定性: | 稳定 Stable |
| 组成型/诱导型: | 诱导型 |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
- ¥1500
- ZYbscience
- 中国/美国
- ZY217453
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃低温保存
- 保质期：
三年
- 英文名：
pESC-TRP
- 库存：
20
- 供应商：
泽叶生物
载体基本信息
载体质粒图谱和多克隆位点信息
载体简介
载体序列
LOCUS pESC-TRP 6525 bp DNA circular SYN 16-SEP-2005
DEFINITION Cloning vector pESC-TRP, complete sequence.
ACCESSION AF063848
VERSION AF063848.1 GI:3228558
SOURCE Cloning vector pESC-TRP.
ORGANISM Cloning vector pESC-TRP
artificial sequences; vectors.
COMMENT This file is created by Vector NTI
http://www.biofeng.com/
COMMENT VNTAUTHORNAME|biofeng.com|
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6525
/organism="Cloning vector pESC-TRP"
/mol_type="genomic DNA"
/specific_host="Escherichia coli K12"
/db_xref="taxon:76665"
/vntifkey="98"
CDS complement(4126..4983)
/vntifkey="4"
/label=AmpR
rep_origin 5117..6272
/vntifkey="33"
/label=2\micron\ori
CDS 468..1139
/vntifkey="4"
/label=TRP1
/note="yeast TRP1 ORF"
terminator complement(1779..1943)
/vntifkey="43"
/label=ADH1\terminator
terminator 2932..3121
/vntifkey="43"
/label=CYC1\terminator
rep_origin complement(1373..1679)
/vntifkey="33"
/label=f1\ori
promoter 2374..2828
/vntifkey="29"
/label=GAL1\promoter
promoter complement(2162..2373)
/vntifkey="29"
/label=GAL10\promoter
misc_feature 2870..2905
/vntifkey="21"
/label=c-myc\tag
misc_feature complement(2092..2118)
/vntifkey="21"
/label=FLAG\tag
misc_feature complement(2074..2157)
/vntifkey="21"
/label=MCS1
misc_feature 2830..2927
/vntifkey="21"
/label=MCS2
rep_origin 3308..3975
/vntifkey="33"
/label=pUC\ori
BASE COUNT 1845 a 1380 c 1462 g 1838 t
ORIGIN
1 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca
61 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg
121 ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc
181 accataaacg acattactat atatataata taggaagcat ttaatagaca gcatcgtaat
241 atatgtgtac tttgcagtta tgacgccaga tggcagtagt ggaagatatt ctttattgaa
301 aaatagcttg tcaccttacg tacaatcttg atccggagct tttctttttt tgccgattaa
361 gaattaattc ggtcgaaaaa agaaaaggag agggccaaga gggagggcat tggtgactat
421 tgagcacgtg agtatacgtg attaagcaca caaaggcagc ttggagtatg tctgttatta
481 atttcacagg tagttctggt ccattggtga aagtttgcgg cttgcagagc acagaggccg
541 cagaatgtgc tctagattcc gatgctgact tgctgggtat tatatgtgtg cccaatagaa
601 agagaacaat tgacccggtt attgcaagga aaatttcaag tcttgtaaaa gcatataaaa
661 atagttcagg cactccgaaa tacttggttg gcgtgtttcg taatcaacct aaggaggatg
721 ttttggctct ggtcaatgat tacggcattg atatcgtcca actgcatgga gatgagtcgt
781 ggcaagaata ccaagagttc ctcggtttgc cagttattaa aagactcgta tttccaaaag
841 actgcaacat actactcagt gcagcttcac agaaacctca ttcgtttatt cccttgtttg
901 attcagaagc aggtgggaca ggtgaacttt tggattggaa ctcgatttct gactgggttg
961 gaaggcaaga gagccccgaa agcttacatt ttatgttagc tggtggactg acgccagaaa
1021 atgttggtga tgcgcttaga ttaaatggcg ttattggtgt tgatgtaagc ggaggtgtgg
1081 agacaaatgg tgtaaaagac tctaacaaaa tagcaaattt cgtcaaaaat gctaagaaat
1141 aggttattac tgagtagtat ttatttaagt attgtttgtg cacttgccta tgcggtgtga
1201 aataccgcac agatgcgtaa ggagaaaata ccgcatcagg aaattgtaaa cgttaatatt
1261 ttgttaaaat tcgcgttaaa tttttgttaa atcagctcat tttttaacca ataggccgaa
1321 atcggcaaaa tcccttataa atcaaaagaa tagaccgaga tagggttgag tgttgttcca
1381 gtttggaaca agagtccact attaaagaac gtggactcca acgtcaaagg gcgaaaaacc
1441 gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa ccatcaccct aatcaagttt tttggggtcg
1501 aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct aaagggagcc cccgatttag agcttgacgg
1561 ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa gggaagaaag cgaaaggagc gggcgctagg
1621 gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc gtaaccacca cacccgccgc gcttaatgcg
1681 ccgctacagg gcgcgtcgcg ccattcgcca ttcaggctgc gcaactgttg ggaagggcga
1741 tcggtgcggg cctcttcgct attacgccag ctgaattgga gcgacctcat gctatacctg
1801 agaaagcaac ctgacctaca ggaaagagtt actcaagaat aagaattttc gttttaaaac
1861 ctaagagtca ctttaaaatt tgtatacact tatttttttt ataacttatt taataataaa
1921 aatcataaat cataagaaat tcgcttattt agaagtgtca acaacgtatc taccaacgat
1981 ttgacccttt tccatctttt cgtaaatttc tggcaaggta gacaagccga caaccttgat
2041 tggagacttg accaaacctc tggcgaagaa ttgttaatta agagctcaga tcttatcgtc
2101 gtcatccttg taatccatcg atactagtgc ggccgccctt tagtgagggt tgaattcgaa
2161 ttttcaaaaa ttcttacttt ttttttggat ggacgcaaag aagtttaata atcatattac
2221 atggcattac caccatatac atatccatat acatatccat atctaatctt acttatatgt
2281 tgtggaaatg taaagagccc cattatctta gcctaaaaaa accttctctt tggaactttc
2341 agtaatacgc ttaactgctc attgctatat tgaagtacgg attagaagcc gccgagcggg
2401 tgacagccct ccgaaggaag actctcctcc gtgcgtcctc gtcttcaccg gtcgcgttcc
2461 tgaaacgcag atgtgcctcg cgccgcactg ctccgaacaa taaagattct acaatactag
2521 cttttatggt tatgaagagg aaaaattggc agtaacctgg ccccacaaac cttcaaatga
2581 acgaatcaaa ttaacaacca taggatgata atgcgattag ttttttagcc ttatttctgg
2641 ggtaattaat cagcgaagcg atgatttttg atctattaac agatatataa atgcaaaaac
2701 tgcataacca ctttaactaa tactttcaac attttcggtt tgtattactt cttattcaaa
2761 tgtaataaaa gtatcaacaa aaaattgtta atatacctct atactttaac gtcaaggaga
2821 aaaaaccccg gatccgtaat acgactcact atagggcccg ggcgtcgaca tggaacagaa
2881 gttgatttcc gaagaagacc tcgagtaagc ttggtaccgc ggctagctaa gatccgctct
2941 aaccgaaaag gaaggagtta gacaacctga agtctaggtc cctatttatt tttttatagt
3001 tatgttagta ttaagaacgt tatttatatt tcaaattttt cttttttttc tgtacagacg
3061 cgtgtacgca tgtaacatta tactgaaaac cttgcttgag aaggttttgg gacgctcgaa
3121 gatccagctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg
3181 ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt
3241 atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa
3301 gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc
3361 gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag
3421 gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt
3481 gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg
3541 aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg
3601 ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg
3661 taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac
3721 tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg
3781 gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt
3841 taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg
3901 tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc
3961 tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt
4021 ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt
4081 taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag
4141 tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt
4201 cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc
4261 gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc
4321 cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg
4381 ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac
4441 aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg
4501 atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc
4561 tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact
4621 gcataattct cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc
4681 aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat
4741 acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc
4801 ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac
4861 tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa
4921 aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat gttgaatact
4981 catactcttc ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg
5041 atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg
5101 aaaagtgcca cctgaacgaa gcatctgtgc ttcattttgt agaacaaaaa tgcaacgcga
5161 gagcgctaat ttttcaaaca aagaatctga gctgcatttt tacagaacag aaatgcaacg
5221 cgaaagcgct attttaccaa cgaagaatct gtgcttcatt tttgtaaaac aaaaatgcaa
5281 cgcgagagcg ctaatttttc aaacaaagaa tctgagctgc atttttacag aacagaaatg
5341 caacgcgaga gcgctatttt accaacaaag aatctatact tcttttttgt tctacaaaaa
5401 tgcatcccga gagcgctatt tttctaacaa agcatcttag attacttttt ttctcctttg
5461 tgcgctctat aatgcagtct cttgataact ttttgcactg taggtccgtt aaggttagaa
5521 gaaggctact ttggtgtcta ttttctcttc cataaaaaaa gcctgactcc acttcccgcg
5581 tttactgatt actagcgaag ctgcgggtgc attttttcaa gataaaggca tccccgatta
5641 tattctatac cgatgtggat tgcgcatact ttgtgaacag aaagtgatag cgttgatgat
5701 tcttcattgg tcagaaaatt atgaacggtt tcttctattt tgtctctata tactacgtat
5761 aggaaatgtt tacattttcg tattgttttc gattcactct atgaatagtt cttactacaa
5821 tttttttgtc taaagagtaa tactagagat aaacataaaa aatgtagagg tcgagtttag
5881 atgcaagttc aaggagcgaa aggtggatgg gtaggttata tagggatata gcacagagat
5941 atatagcaaa gagatacttt tgagcaatgt ttgtggaagc ggtattcgca atattttagt
6001 agctcgttac agtccggtgc gtttttggtt ttttgaaagt gcgtcttcag agcgcttttg
6061 gttttcaaaa gcgctctgaa gttcctatac tttctagaga ataggaactt cggaatagga
6121 acttcaaagc gtttccgaaa acgagcgctt ccgaaaatgc aacgcgagct gcgcacatac
6181 agctcactgt tcacgtcgca cctatatctg cgtgttgcct gtatatatat atacatgaga
6241 agaacggcat agtgcgtgtt tatgcttaaa tgcgtactta tatgcgtcta tttatgtagg
6301 atgaaaggta gtctagtacc tcctgtgata ttatcccatt ccatgcgggg tatcgtatgc
6361 ttccttcagc actacccttt agctgttcta tatgctgcca ctcctcaatt ggattagtct
6421 catccttcaa tgctatcatt tcctttgata ttggatcata ttaagaaacc attattatca
6481 tgacattaac ctataaaaat aggcgtatca cgaggccctt tcgtc
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文献和实验相关实验
Trp平板上，转化效率应该在1 x105 colonies/mg DNA以上。 4.杂交效率不高，该如何处理? 在杂交中，预转化的诱饵细胞的数量可能不够。当对诱饵菌株进行液体培养过夜时，应挑选大的、新鲜的克隆进行培养，经过离心和重悬后，再使用血球计对细胞进行计数。密度应该在1 x109/ml。 一个甚至两个融合蛋白对酵母细胞有毒。你可以通过重组方法来减轻毒性，同时又能保证蛋白的相互作用。或者使用表达水平较低的载体。也可以在琼脂平板或滤膜上进行杂交。但同时必须作杂交对照实验。
喜欢转贴的，请注明来自中国生命科学第一网：丁香园。 根据自己体会和蛋白版的既往精华帖子，总结了没有发现蛋白质表达的原因，或者蛋白质不表达的原因，欢迎大家拍砖。 1.载体构建错误。 这个屡见不鲜，很多克隆新人经常弄错读码框。比如Qiagen的pQE系列载体，其克隆位点常有一两个碱基的区别；另外有些酶产生粘端有些酶产生平端，这些都容易导致读码框错误，从而表达不出来。 2.宿主菌选择不当。不同的宿主菌其基因型是不一样的。有些经过特殊修饰的载体，或者特殊用途的载体，或者有特殊启动
，然后重新检测其是否自激活，但要注意重组也有可能破坏蛋白之间的互作。3.转化效率太低怎么办？可以采用以下方法解决：1)检测一下DNA的纯度，如果可以的话，重新用乙醇纯化。2)DNA-BD/诱饵蛋白很可能是有毒的。3)不适当的培养基，重新配制培养基，并做对照转化。4)检测pGBT9对照载体的转化效率，放置于SD/–Trp平板上，转化效率应该在1 x105 colonies/mg DNA以上。4.杂交效率不高，该如何处理？在杂交中，预转化的诱饵细胞的数量可能不够。当对诱饵菌株进行液体培养过夜时，应挑选
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