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- HZbscience
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- HZ0262
- 2025年07月11日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
半年
- 英文名：
pMD2.G
- 库存：
200
- 供应商：
沪震生物
- 规格：
5μg
pMD2.G
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 产品规格 | 优惠价 |
|---|---|---|---|
| HZ0262 | pMD2.G | 20μl |
¥请询价 |
使用说明
基本信息
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC ori |
| 终止子: | beta-globin poly(A) |
| 质粒分类: | 病毒系列，慢病毒包装载体 |
| 质粒大小: | 5822bp |
| 质粒标签: | VSV-G |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37℃，有氧 LB |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒简介
质粒图谱
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文献和实验编码区的基因片段，其由5'末端的stat密码子（ATG）和3'末端的终止密码子（TAA，TAG或TGA）结合。然后将目的基因片段插入pMD18-T载体中以构建重组质粒，通过DNA测序鉴定。用指定的酶消化重组pMD18-T质粒，并通过以下方案将检索到的目的DNA片段亚克隆到pET-32α（+）载体中以产生重组表达载体。将约129bp的TBO基因片段插入pET-32α（+）载体（5900bp）用相同的限制酶在37℃消化pET-32α（+）载体和重组pMD18-T载体1小时，然后通过在65℃温育10分钟
在丁香园见过很多大佬分享载体构建经验，所以我这里写的T载体构建只能算是入门级，给新手提供一点思路，有什么不足之处还希望大家多多指正。 我克隆的这个片段大小是1.8kb，用的是TaKaRa的LA-Taq酶做的PCR。 反应体系：5*buffer 5 ul MgCl2 5 ul dNTPs 8 ul Primer 1 1 ul Primer 2 1 ul LA-Taq 0.5 ul cDNA 1 ul (1ug左右基因组DNA） ddH2O up to 50 ul
T 瞬时转染包装流程，照着走就行： 设计载体：确认目的基因、启动子、荧光/抗性标记，构建慢病毒穿梭质粒。大基因（>4 kb）建议换 GV747 专用载体保出毒。 铺 293T 细胞：转染前把 293T 铺到适合密度（一般转染当天 60-80% 融合度最佳），保证状态好、无支原体。 配质粒混合液：按约定比例混合穿梭质粒、pspAX2、pMD2.G（以及必要时的 rev 质粒）。比例很关键，常见是穿梭:包装:包膜 ≈ 1:1:1 附近，具体以体系说明为准。 转染：用转染试剂（如 Lenti-Pro
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