无血清、DMSO细胞保存液 津滨海械备20156050号

做了 5 年 MTT 实验，跟你分享几点心得体会

度 OD 值，以反映出活细胞数目。实验步骤1. 接种细胞：用含 10% 胎牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔合适的细胞数量接种到 96 孔板，每孔体积 180 ul。2. 培养细胞：同一般培养条件，可根据试验目的和要求决定培养时间。3. 呈色：每孔加 MTT 溶液（5 mg/ml 用 PBS 缓冲液 pH=7.4 配制）20 ul。继续孵育 4 小时，终止培养，小心弃去孔内培养上清液，对于悬浮细胞，需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加 150ul DMSO，振荡 10 分钟，使结晶物充分融解

人外周血PBMC的制备及注意事项

人外周血PBMC的制备流程 收集抗凝人外周血，用 1640 无血清培养基或 PBS 按照 1:1 的比例稀释，上下颠倒混匀或者用移液枪吹打混匀。 在 15 mL 离心管中，先加入 3 mL 充分混匀的 Ficoll 液（1.077 g/mL），再沿着管壁缓慢加入2 mL稀释后的血液，血液和 Ficoll 液分层明显为成功。 注：Ficoll 提前半小时从 4℃ 冰箱取出恢复到室温，温度过高会导致分离不明显，温度过低会导致密度过大，同样分离效果不好， 20~25℃ 最佳。。 将样本小心转移

如何让细胞乖乖的死去活来

科幻电影中将冻存若干年的生命体重新解冻复活的情节在生命科学研究过程中每一天都在上演。为了将每一种有生命的细胞较好的保存其原有的细胞特性或者长久的保存种质资源，实验人员往往将细胞用特殊配置的细胞冻存液保存于-196℃ 的液氮，使得细胞暂时脱离生长状态，等到实验需要的时候再从液氮中取出复苏应用。在这一看似神奇的生命存储过程中，我们不禁要问，这是如何实现的呢？ 其实，细胞冻存和复苏的教科书和实验手册上面都有。小编不想再重复了。这里，我要谈谈应该注意的一些事项和技巧，大部分都是血泪教训