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冷藏
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长期
- 英文名:
Esculin sesquihydrate
- 库存:
373
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- CAS号:
66778-17-4
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销售七叶苷厂商,我公司是生物试剂、化学试剂专业供应商,立足北京,服务全国的高校、研究所、医院、企业科研部门,欢迎各位老师来电垂询订购。
名称:七叶苷厂商
英文名:Esculin sesquihydrate
编号:QN0691
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
别名:马栗树皮苷;七叶树苷
CAS号:66778-17-4
分子式:C15H16O9
分子量:340.28
我公司的七叶苷厂商,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销售下列产品:
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七叶苷厂商关键词:七叶苷,马栗树皮苷,七叶树苷
·β-甘油磷酸二钠盐
编号:QN0725
英文名称:β-Glycerol phosphate disodium salt pentahydrate
规格:10g
本品常用作小牛肌醇-1-磷酸酶的底物,测定磷酸酶的含量。
别名:β-甘油磷酸钠
CAS号:819-83-0或154804-51-0
分子式:C3H7Na2O6P·5H2O
分子量:306.12
纯度:≥98%
性状:淡黄色或白色结晶粉末
储存条件:2~8℃
·肌酸酐
编号:QN0779
英文名称:Creatinine
规格:25g
别名:肌酸酐试剂;肌氨基酐;缩水肌肉素
CAS号:60-27-5
分子式:C4H7N3O
分子量:113.12
性状:白色结晶
储存条件:2~8℃
·嘌呤霉素
编号:QN0078
英文名称:Puromycin
规格:25mg|100mg
本品是蛋白质合成抑制剂。抑制细菌、藻类原生物和哺乳动物细胞生长。
CAS:58-58-2
分子式:C22H29N7O5·2HCl
分子量:544.43
储存条件:-20℃
纯度:≥98%(TLC)
性状:白色或白中带有黄色的粉末
别名:二盐酸嘌呤霉素;嘌呤霉素盐酸盐
溶解性:溶于水,参考浓度50mg/ml。
嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑链霉菌(Streptomyces alboniger)发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌,各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物,能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后,不会参与随后的任何反应,从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(PAC),赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。
嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关,现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下,嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。
使用方法:
1.建议使用浓度
哺乳动物细胞:1-10 μg/mL,最佳浓度需要杀灭曲线来确定;
大肠杆菌:LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌,使用浓度为125μg/mL。注:使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节,而且受宿主细胞本身的影响。
2.溶解方法
用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的母液,经0.22 μm滤膜过滤除菌后分装于-20℃冻存;也可溶于甲醇,配制成10 mg/ml的储存液。
3. 嘌呤霉素杀灭曲线的确定(以shRNA转染或者慢病毒转导为例)
嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株,确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线(kill curve)。
1)Day 1:24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板,铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜;
2)Day 2:
a)准备筛选培养基:含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0-15μg/mL,至少5个梯度);
b)往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基;之后37℃孵育细胞;
3)Day 4:更换新鲜的筛选培养基,并观察细胞存活率。
4)根据细胞的生长状态,约2-3天更换新鲜的筛选培养基;
5)每日监测细胞,观察存活细胞率,从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非转导细胞的药物最低浓度。
4. 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选
等转染含有pac基因的质粒后,细胞在含有嘌呤霉素的培养基中增殖,以筛选出稳定转染子。
1)细胞转染48h后,将细胞(原样或稀释)置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。
注意:当细胞处于分裂活跃期时,抗生素作用最明显。细胞过于密集,抗生素产生的效力会明显下降。最好进行细胞分盘使其密度不超过25%。
2)每隔2-3天,移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。
3)筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间,这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。注意:每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要48h,有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3-10天。
4)转移和放置5-10个抗性克隆到一个35mm的培养皿中,用选择培养基继续培养7天。此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。
注意事项:
1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 嘌呤霉素为有毒化合物,操作时请小心拿放。
七叶苷厂商关键词:七叶苷,马栗树皮苷,七叶树苷
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