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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃,避免反复冻
- 保质期:
长期
- 英文名:
RIPA lysis buffer (Weak)
- 库存:
384
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应RIPA裂解液(弱)厂家直销,我公司销售全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:RIPA裂解液(弱)厂家直销
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
英文名:RIPA lysis buffer (Weak)
编号:SY0315
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer),其本意是Radio Immunoprecipitation Assay,是一种传统的细胞组织快速裂解液,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有裂解作用。根据其裂解液的强度不同,大致可以分为强、中、弱三类。
本品为较为温和的裂解液(即RIPA裂解液(弱)),含有sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。
注意事项
1)需自备PMSF。
2)裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3) 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度(SY0298)。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期12个月。
使用说明:
(一) 细胞样品
1)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
2)贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
3)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。
(二)组织样品:
1)把组织剪切成细小的碎片。
2)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
3)按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
【注】:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
除RIPA裂解液(弱)厂家直销外,我公司正在打折促销以下产品:
·36mm透析袋(透析分子量14kDa)
编号:SY0416
英文名称:Dialysis Tube MD44 (Mw14,000)
规格:1卷(5米)
透析袋通常为半透膜制成的袋状,以此为屏障对目的蛋白进行脱盐以及进行缓冲液的置换,透析的主要原理是:透析袋内样品的生物大分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到透析袋外,直到透析袋内外两边的浓度达到平衡为止。透析袋透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析袋透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析。
本透析袋参数:扁平宽度为44mm,直径36mm,截留分子量14kDa。
储存条件:4℃,有效期2年。
注意事项
1)每次使用后将余下的膜放回袋子并密封好,以防干裂。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1)把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段,具体长度需根据待透析的样品而定。
2)在大体积(eg.500mL)的2%(W/V)的碳酸氢钠和1mmol/L EDTA (pH=8.0)中将透析袋煮沸10min。
3)用蒸馏水彻底清洗透析袋。
4)放在大体积(eg.500mL)的1 mmol/L EDTA (pH=8.0)中将之煮沸10min。
5)冷却后,存放于4℃,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。【注】:从此时起取用透析袋必须戴手套。
6)在使用前要用蒸馏水将透析袋里外加以清洗干净。
7)使用时,一端由透析夹夹紧,另一端灌满水,用手指稍加压,检查不漏,方可装入待透析液。
【注】:
① 通常要留1/3~1/2的空间,以防透析过程中,透析的小分子量较大或样品含盐量较高时,袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。
② 为了加快透析速度,除多次更换透析液外,还可使用转子边搅拌边透析。透析的容器要大,如大烧杯等。
RIPA裂解液(弱)厂家直销关键词:RIPA裂解液,RIPA lysis buffer (Weak),SY0315,RIPA裂解液(弱)
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RIPA裂解液(弱)厂家直销关键词:RIPA裂解液,RIPA lysis buffer (Weak),SY0315,RIPA裂解液(弱)
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