YT133型Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒现

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北京百奥莱博专业生产销售YT133型Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒现货价格，我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：YT133型Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒现货价格
品牌：百奥莱博
规格：20次|50次
产地：国产|进口
英文名：Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit
编号：YT133
本试剂盒是用EGFP标记的重组人Annexin V来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷酯酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。一个包装的本试剂盒共可以检测20个样品。可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。

试剂盒组份：
Annexin V-EGFP—————————100μl
Annexin V-EGFP结合液——————12ml
碘化丙啶染色液—————————220μl

Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷酯结合蛋白，参与细胞内的信号转导。但仅Annexin V被报道可以调控一些PKC的活性。

Annexin V选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine，简称PS)。磷酯酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷酯酰丝氨酸外翻到细胞表面，即细胞膜外侧。磷酯酰丝氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应。而Annexin V和外翻到细胞表面的磷酯酰丝氨酸结合后可以阻断磷酯酰丝氨酸的促凝血和促炎症反应活性。

用带有绿色荧光的荧光探针EGFP标记的Annexin V，即Annexin V-EGFP，就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷酯酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。

本试剂盒还提供了碘化丙啶染色液，碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞，呈现红色荧光。对于坏死细胞，由于细胞膜的完整性已经丧失，Annexin V-EGFP可以进入到细胞浆内，与位于细胞膜内侧的磷酯酰丝氨酸结合，从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。

综上所述，用Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色后，正常的活细胞不被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色；凋亡早期的细胞仅被Annexin V-EGFP染色，碘化丙啶染色呈阴性；坏死细胞和凋亡晚期的细胞可以同时被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色。

注意事项：
1. 如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
2. 染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
3. 如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-EGFP，最终导致染色失败。
4. 荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。

储存条件：4℃避光，有效期6个月。

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·dNTP混合溶液(2.5mM)
编号：YT390
英文名称：dNTP Mixture (2.5mM each)
规格：1ml
本dNTP Mixture为dATP、dCTP、dGTP和dTTP的混合溶液，每种的浓度均为2.5mM，适合用于PCR、real-time PCR、RT-PCR、cDNA或普通DNA合成、引物延伸反应、DNA测序、DNA标记等各种常规分子生物学反应。

本dNTP溶液用超纯水配制，并用高纯度NaOH溶液调节pH值至7.0，浓度为2.5mM each，即dATP、dCTP、dGTP和dTTP的浓度均为2.5mmol/L。
本dNTP溶液不含DNase、RNase、phosphatase和蛋白酶。
本dNTP溶液经测试，可以直接用于PCR等各种常规分子生物学反应。

储存条件：-20℃。

·DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)
编号：YT483
英文名称：Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)
规格：1ml
本品是一种经过我们多次实验证实、可以用于DNA oligo退火的缓冲液。该退火缓冲液不仅可以用于常规的DNA oligo的退火，而且特别适合于较难退火的用于RNAi(也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。用于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列，极易自身形成发夹结构，从而影响两条DNA oligo的正确退火。使用百奥莱博的Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)，可以有效避免DNA oligo自身形成发夹结构，并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性克隆。

使用本品操作非常简单，只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)按照一定比例混合后，置于PCR仪上，约90分钟即可完成。如果一次退火反应体积为100微升，一个包装的退火缓冲液可以进行50次退火反应。

使用说明：

1. 把待退火的DNA oligo用经灭菌的MiliQ水或重蒸水配制成50μM。溶解Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)，混匀备用。

2. 如下设置退火反应体系：
Nuclease-Free Water——>40µl
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)——>20µl
DNA oligo A (50µM)——>20µl
DNA oligo B (50µM)——>20µl
按照上述顺序依次加入各种试剂，混匀。如果所用的PCR仪没有热盖，滴加矿物油(mineral oil)以防止蒸发。

3. 如下设置PCR仪进行退火反应：

步骤	温度	时间	说明
1	95℃	2分钟	让oligo充分变性
2	每8秒下降0.1℃，降至25℃(注1)	约90分钟	退火
3	4℃	长时间保持	暂时存放

注1：如果所用的PCR仪不具备下降0.1℃的功能，也可以设置为每90秒下降1℃。

4. 退火结束后可以直接用于连接反应，也可以-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应，最好用纯化试剂盒进行纯化，或者确保退火产物在反应体系中体积不超过5%，以避免Annealing Buffer对后续的酶反应体系的干扰。

储存条件：-20℃，有效期一年。


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·C/EBP凝胶迁移突变探针(1.75μM)
编号：YT211
英文名称：C/EBP Mutation Probe For EMSA(1.75μM)
规格：60μl
本探针是用于EMSA(也称gel shift)研究的C/EBP consensus oligonucleotide的突变体。可以作为EMSA探针－C/EBP的阴性对照，用于EMSA结合反应中突变探针的冷竞争反应等。一个包装的突变探针，如果用于同位素标记EMSA探针的突变探针冷竞争反应，可以进行30-60个突变探针的冷竞争反应。

EMSA突变探针－C/EBP的序列如下：
5"-TGC AGA GAC TAG TCT CTG CA-3"
3"-ACG TCT CTG ATC AGA GAC GT-5"

EMSA突变探针－C/EBP中C/EBP的公认的结合位点发生了突变，从而使C/EBP无法和该突变探针结合。在探针冷竞争反应中，正常的标记探针和C/EBP的结合的条带会被抑制；而在突变探针冷竞争反应(cold competition)中，正常的标记探针和C/EBP的结合的条带不会被抑制。参考下图。


一个典型的EMSA/Gel- Shift分析图
1,阴性对照反应(标记探针)；
2,常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针)；
3,探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记探针)；
4,突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记突变探针)；
5,Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋目的转录因子的特异抗体)。

注意事项：
1. 避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于EMSA的详细操作可以参考我们的EMSA试剂盒的使用说明。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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