高保真PCR MasterMix说明书

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括高保真PCR MasterMix说明书在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：高保真PCR MasterMix说明书
产地：国产|进口
规格：1ml
品牌：百奥莱博
本品用于PCR，尤其用于PCR产物的克隆，DNA*(代"片")段的平滑化。是从克隆有Thermococcus Kodakaraensis DNA聚合酶基因的质粒在大肠杆菌中经诱导表达分离纯化而来。该酶所具有的超强3’→ 5’外切酶活性使得其扩增保真性比Pfu DNA Polymerase更高，保真性是Taq的约50 倍，同时具有合成速度快的特点，聚合速度约为普通Pfu DNA Polymerase 的5倍，Taq DNA Polymerase 的2倍，达到100-138bp/秒，可以在短时间内获得高产量的扩增产物，特别适合于高保真地扩增6kb以内的PCR产物，扩增所得的DNA为平末端，可用于基因克隆、表达及突变分析等分子生物学实验。本产品包含KOD DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可最大限度的减少人为误差。本产品使用方便快捷，能避免PCR操作过程中的污染，使用时只需取适量2×KOD PCR MasterMix溶液，加入模板和引物，并加入去离子水补足体积，使MasterMix溶液浓度为1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀，操作需在冰上进行。

单位定义：75℃活性测定条件下，在30min内摄入10nmol的dNTPs 使成为酸性不溶物时所需要酶的活性定义为1U。

储存条件：-20℃。

关于高保真PCR MasterMix说明书的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·血浆miRNA提取试剂盒
编号：ALH067
英文名称：Plasma microRNA Extraction Kit
规格：50次
本试剂盒采用独特的裂解液迅速直接裂解血清血浆RNA酶，强烈有机抽提去除蛋白和DNA，RNA包括微小分子RNA在高浓度乙醇下吸附于离心柱内特殊硅基质膜， 再通过一系列特殊漂洗液快速的漂洗－离心的步骤，漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质进一步去除， 最后低盐的洗脱液将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

近年来对RNA干扰和调节性小RNA的广泛研究迫切需要一种能有效提取15～30核苷酸左右大小RNA（包括siRNA和miRNA）的试剂盒。但是传统的RNA提取方法如硅胶膜不能有效吸附回收，酚/胍抽提和异丙醇或者乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA，对于血清、血浆样本更是由于其自身特点更难提取。本试剂盒的出现很好的解决了这一问题

产品组分：
Lysis buffer————避光50 ml
Wash Solution 1————12 ml（第一次使用前加入28ml 无水乙醇）
Wash Solution 2/3————10 ml（第一次使用前加入42ml 无水乙醇）
RNase-free H2O————10 ml
吸附柱和收集管————50 套

产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.也不需要乙醇沉淀等容易丧失微小分子RNA的步骤。
3.特殊的裂解液配方，可以处理更多的血清/血浆样品。
4.多次柱漂洗确保高纯度，可用于RNAi，RT-PCR，Northern-blot和各种实验。

注意事项
1. 第一次使用前请先在Wash Solution 1 瓶和Wash Solution 2/3 瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
2. 除说明外，所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm 的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
3. 需要自备乙醇，氯*(代"仿")。
4. Lysis buffer 和Wash Solution 1 含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
5. RNA 纯度及浓度检测：
一般情况下通过测量OD260 值可以知道RNA 产量，测量OD260/OD280 比值可以是衡量蛋白质污染程度的指标之一，但是由于血清/血浆的RNA 含量特别低，已经低于分光光度计测量的下限，无法测量准确，因此一般无法通过测量OD 值或者比值的方法来判断纯度或者浓度，只能通过下游做荧光定量RT-PCR 来判断产量。同时无细胞的血清/血浆中的RNA 主要是小于100 nt 的小RNA，因此传统的电泳检测RNA 完整性并不适用于血清/血浆RNA。

储存条件：室温，有效期6个月。(lysis buffer需4℃避光保存)


高保真PCR MasterMix说明书关键词：百奥莱博,高保真PCR MasterMix


·一步法定向表达试剂盒
编号：ALH359
英文名称：One step directional expression Kit
规格：20次
本试剂盒载体采用了世界最先进的定向拓扑异构酶克隆技术可以在5分钟内将待表达目的基因（高保真酶扩增的平末端片段）一步法定向克隆到高效pET增强型载体，利用T7lac启动子进行严谨调控，高效表达。

试剂盒组分：
载体————————————20μl
10×Enhancer————————20μl

试剂盒特点：
1. 简单快速，加入待表达基因片段室温仅需5分钟便可完成原核表达载体构建。
2. 定向克隆技术，超过90%插入为正确方向插入，减少克隆筛选耗费的时间。
3. T7lac启动子严谨调控本底表达，实现表达过程的可控和高效表达。
4. 氨苄抗性标记筛选，N端和C端6 ´ Histag标签方便表达后纯化。
5. 带肠激酶(EK)酶切位点，可以方便将标签切除得到不带标签的蛋白。

储存条件：-20℃，有效期半年。

·DNA加A尾试剂盒
编号：ALH352
英文名称：Flat end DNA add A tail Kit
规格：50次
本试剂盒提供了加A尾需要的所有成分，可以在20分钟左右完成整个过程。由Pfu、Pwo、Vent或KOD等有3’→5’外切酶活性的高保真DNA聚合酶扩增的PCR产物为不带A尾的平末端DNA*(代"片")段，如该平末端DNA*(代"片")段需要和T载体相连接，需要先利用Taq DNA polymerase在平末端片段后加上A尾后才能与T载体的T头互补连接。

试剂盒组分：
Taq DNA polymerase——————————50μl
10×A-tailing buffer—————————50μl
dATP Mix———————————————50μl

操作步骤：
1. 平末端PCR 产物用PCR 清洁（无非特异扩增）或者胶回收纯化（有非特异扩增）。
2. 纯化好的平末端DNA 片段按以下反应体系加A尾:
平末端DNA 片段—————————7μl（不超过1μg）
dATP Mix————————————1μl
10×A-tailing buffer——————1μl
Taq DNA polymerase———————1μl
3. 轻轻混匀后72℃保温20-30 分钟。
4. 加A 尾的产物可以不需要再次清洁或者胶回收纯化，可直接用于连接反应。

储存条件：-20℃。


高保真PCR MasterMix说明书关键词：百奥莱博,高保真PCR MasterMix

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