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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
半年
- 英文名:
pSUMO-mut
- 库存:
200
- 供应商:
沪震生物
- 规格:
5ug
pSUMO-mut
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 产品规格 | 优惠价 |
|---|---|---|---|
| HZ0904 | pSUMO-mut | 20μl |
¥请询价 |
使用说明
基本信息
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体;蛋白表达质粒 |
|---|
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文献和实验只有被酶切线性化整合效率才能大大提高,环状质粒整合效率是很低的。选用不同的内切酶线性化可得到不同的转化子。如对载体pPC19选用BgiⅡ线性化,转化后可得到Muts表型转化子;选用SaI或StuI线性化,转化后可得到Mut表型转化子。3、转化 目前对真核细胞的转化方法有多种,例如对于P.Pastoris的转化目前有4种方 法:①锂盐法;②PEG法;③原生质球法;④电穿孔法。锂盐法和PEG法方法简便,但效率很低,每微克DNA只有几十个转化子或更低,一般不多用。原生质球法和电穿孔法转化率都较高,而且一般可得
我先说我有的质粒和菌株:PPIC9K,PPIC9,PPICZahphaA,B,C 以及一个改造的PPIC9K载体,EcoRI和BamHI双酶切,C末端引入了一个6histag 菌株:GS115,KM71,X33,以及十几个空载体对照菌株 我的酵母表达Protocol: >10ug质粒用Sal线性化,加1/10体积的3M NaAC PH5.2和3倍体积的乙醇沉淀 70%乙醇洗一遍,20ul ddH2O重溶 按照公司手册做电转化感受态,一般OD
比较,Mut-细胞对氧的要求亦较低,生长也较慢。为解决这个问题,Jeffrey等用甲醇加甘油混合饲养,得到了255mg/L的CD40配体(CD40L)。但由于甘油可部分阻遏aoxl启动子,蛋白表达可能并不处于最佳水平。Sreekrishna等最近运用山梨醇和甲醇混合批量饲养发酵,在不到4个星期的时间里,他们用一个4L的发酵罐连续完成了几个周期的生产。在这种发酵方式中,大部分碳源由山梨醇提供,减少了总的甲醇消耗,因而效率大大提高。 最近,一种无需甲醇诱导而能组成性表达外源蛋白的毕赤酵母载体
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