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Site-directed Gene Mutagenesis Kit
929
北京百奥莱博科技有限公司
10次
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
YT027型基因定点突变试剂盒特价促销的品牌:百奥莱博,是优质的基因结构和功能产品,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多基因定点突变试剂盒等基因结构和功能产品请联系我司咨询订购。
名称:YT027型基因定点突变试剂盒特价促销
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
规格:10次
英文名:Site-directed Gene Mutagenesis Kit
编号:YT027
本试剂盒可以用于点突变,多个邻近密码子的突变,单个或多个邻近密码子的缺失(deletion)或插入(insertion)。
本试剂盒是一个利用目前最新的基因点突变技术设计而成的试剂盒。只需通过基于PCR的突变质粒的合成,和基于Dpn I的模板质粒的消化,转化培养以及后续的酶切或测序鉴定,即可得到预期的突变质粒(参考图1)。累计操作时间不足2小时即可完成基因的定点突变。
参考上图,使用本试剂盒时需要先设计长度通常为30个碱基以上的互补的两个引物,在引物中含有预期的突变位点。然后以待突变的质粒为模板,用这两个引物进行PCR扩增反应。这样可以产生含有预期的突变位点的双链质粒,但这个双链质粒中有两个nick位点。待突变的质粒通常来源于大肠杆菌等细菌,在细菌中会被甲基化修饰,而在体外通过PCR扩增得到的质粒不会被甲基化。这样用甲基化酶Dpn I处理,可以消化掉待突变的质粒模板,而使通过PCR扩增出来的含有突变位点的质粒被选择性地保留下来。这样把Dpn I处理过的产物转化细菌后,质粒中有两个nick位点可以被大肠杆菌修复,得到的克隆就会含有预期的突变质粒了。
本试剂盒提供了DH5α甘油菌,可用于感受态细菌的制备。
试剂盒组份:
Pfu DNA Polymerase | 10μl |
Reaction Buffer(10X) | 100μl |
dNTP Mix(2.5mM each) | 50μl |
Dpn I | 10μl |
DH5α 甘油菌 | 200μl |
Nuclease-Free Water | 1ml |
步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 说明 |
1 | 1 | 95℃ | 1分钟 | 最初变性 |
2 | 18 | 95℃ | 40秒 | 变性 |
60℃ | 1分钟 | 退火 | ||
68℃ | 1分钟/kb | 延伸 | ||
3 | 1 | 72℃ | 10分钟 | 延伸、补全 |
4 | 1 | 4℃ | 长时间保持 | 暂时存放 |
北京百莱博科技有限公司是基因结构和功能产品的专业生产供应销售商,恭候您的咨询选购YT027型基因定点突变试剂盒特价促销。
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