YT027型基因定点突变试剂盒特价促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

YT027型基因定点突变试剂盒特价促销的品牌：百奥莱博，是优质的基因结构和功能产品，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多基因定点突变试剂盒等基因结构和功能产品请联系我司咨询订购。

名称：YT027型基因定点突变试剂盒特价促销
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：10次
英文名：Site-directed Gene Mutagenesis Kit
编号：YT027
本试剂盒可以用于点突变，多个邻近密码子的突变，单个或多个邻近密码子的缺失(deletion)或插入(insertion)。

本试剂盒是一个利用目前最新的基因点突变技术设计而成的试剂盒。只需通过基于PCR的突变质粒的合成，和基于Dpn I的模板质粒的消化，转化培养以及后续的酶切或测序鉴定，即可得到预期的突变质粒(参考图1)。累计操作时间不足2小时即可完成基因的定点突变。



参考上图，使用本试剂盒时需要先设计长度通常为30个碱基以上的互补的两个引物，在引物中含有预期的突变位点。然后以待突变的质粒为模板，用这两个引物进行PCR扩增反应。这样可以产生含有预期的突变位点的双链质粒，但这个双链质粒中有两个nick位点。待突变的质粒通常来源于大肠杆菌等细菌，在细菌中会被甲基化修饰，而在体外通过PCR扩增得到的质粒不会被甲基化。这样用甲基化酶Dpn I处理，可以消化掉待突变的质粒模板，而使通过PCR扩增出来的含有突变位点的质粒被选择性地保留下来。这样把Dpn I处理过的产物转化细菌后，质粒中有两个nick位点可以被大肠杆菌修复，得到的克隆就会含有预期的突变质粒了。

本试剂盒提供了DH5α甘油菌，可用于感受态细菌的制备。

试剂盒组份：

Pfu DNA Polymerase	10μl
Reaction Buffer(10X)	100μl
dNTP Mix(2.5mM each)	50μl
Dpn I	10μl
DH5α 甘油菌	200μl
Nuclease-Free Water	1ml

储存条件：-20℃，有效期一年。

使用说明：

1. 引物设计：
用于特定基因突变的引物需要单独设计，请参考如下一些基本原则进行设计：
(1) 共需设计两条互补的引物。可以先集中设计一条，然后就可以得到互补的另一条引物。
(2) 引物的长度通常为25-45个碱基。
(3) 引物中突变位点任何一侧都必需满足 4X(GC碱基数)＋2X(AT碱基数) ≥45。但引物也不宜过长，否则通常会形成非常稳定的二级结构。通常把突变位点两侧的碱基数控制在15个左右，且使两侧按照上述计算得到的数值相近。
例如引物为agtcaggccaattcgaagcagtcgaattgccaag，其中蓝色的aag为突变位点，则
左侧：4X(GC碱基数)＋2X(AT碱基数)＝4X8＋2X7＝46≥45
右侧：4X(GC碱基数)＋2X(AT碱基数)＝4X8＋2X8＝48≥45
(4) 在可能的情况下，尽量把引物的GC含量控制在40％-60％。
(5) 在可能的情况下，尽量使引物不要产生非常稳定的二级结构和引物二聚体。二级结构和二聚体可以通过一些软件进行分析。
(6) 最好使用经过PAGE纯化的引物或更高纯度的引物。

2. 引物的配制：
如果合成得到的一个引物A的量是20nmol，另外一个互补引物B的量是19nmol。在引物A中加入200微升水，配制成浓度为100µM，在引物B中加入190微升水也配制成浓度为100µM。吸取20微升100µM引物A和20微升100µM引物B到一新的离心管中，再加入160微升水，混匀后即可得到可以直接用于基因定点突变反应的引物(10µM each)。

3. 待突变模板质粒的选择：
选择GC含量在40-55％的待突变模板质粒，并且每一个50bp左右的局部GC含量最好也不超过70%。如果GC含量过高，请先把目的基因克隆到其它合适的载体上，再进行基因定点突变反应。另外目的基因GC含量最好也在40-55％的范围，并且每一个50bp左右的局部GC含量最好也不超过70%。如果目的基因GC含量过高，而突变位点不在高GC含量区域，可以先把该基因的不含高GC含量的一个区域克隆出来，进行定点突变，然后再把突变后的片断克隆回原基因中。如果必需使用高GC含量的质粒模板，或者有局部高GC含量的质粒模板，请另外使用专门用于高GC含量模板的PCR反应试剂。
必需使用从dam＋的大肠杆菌(这类菌中质粒可以被甲基化)中抽提得到的质粒用于基因定点突变。常用的大部分大肠杆菌都是dam＋的，包括DH5α、JM109等。

4. 基因定点突变反应：
(1) 如下设置基因定点突变反应体系：
Nuclease-Free Water———>?µl
Reaction Buffer (10X)——>5µl
引物 (10µM each)————>2µl
dNTP Mix (2.5mM each)——>4µl
待突变模板质粒(0.5µg)——>?µl
总体积——————————>49µl
按照上面的顺序依次加入各种试剂。在上述反应体系中，根据待突变模板质粒的量，计算出需加入的Nuclease-Free Water的量，使总体积为49微升。适当混匀后，加入 1 ul Pfu DNA Polymerase，混匀。如果用的PCR仪没有热盖，在反应体系上加入一滴矿物油(mineral oil)以防止蒸发。
(2) 按照如下参数设置PCR仪：

步骤	循环数	温度	时间	说明
1	1	95℃	1分钟	最初变性
2	18	95℃	40秒	变性
		60℃	1分钟	退火
		68℃	1分钟/kb	延伸
3	1	72℃	10分钟	延伸、补全
4	1	4℃	长时间保持	暂时存放

说明：上面表格中1分钟/kb表示，如果待突变的质粒为6kb，那么68℃的延伸时间为6分钟。

5. Dpn I消化：
PCR反应后，直接在PCR反应体系中加入1微升Dpn I，混匀后37℃孵育1小时。37℃孵育可以在PCR仪上进行，也可以在水浴锅中进行。Dpn I消化完毕后可以直接用于转化，或者-20℃保存备用。

6. 转化、挑克隆鉴定：
感受态细菌的转化效率必需至少在107以上，否则很难得到克隆。根据所使用的感受态细菌，加入尽量多的经过Dpn I消化后的突变产物用于转化。通常每100微升感受态细菌中可以加入5-10微升经过Dpn I消化后的突变产物。按照所使用的感受态细菌的操作方法进行操作，在涂板前通过离心浓缩的办法，把所有被转化后的细菌，全部涂布到含有适当抗生素的平板上，培养过夜。通常会得到50个以下的克隆。如果发现克隆有上千个，那么肯定是有什么地方出了问题。
对于得到的克隆，可以先挑克隆小抽酶切鉴定。以确认得到的质粒的大小和质粒中插入片断的大小与预期结果是否相符。
取3-5个酶切鉴定正确的克隆去测序，以最终确认得到的克隆是否是预期的突变克隆。通常大约每2个克隆中会得到一个预期的突变克隆。但有时也可能会因为随机因素，会测序了3-5个克隆才得到一个预期的突变克隆。

想要了解更多关于YT027型基因定点突变试剂盒特价促销的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息，请和我们联系。此外我公司还销售下面的产品：

·细菌冻存液(细菌保存液)
编号：YT033
英文名称：Bacterial Cryopreservation Solution
规格：50ml
本品可以用于各种常见细菌的冷冻保存。通常-20℃可以保存菌种一年，-80℃可以长期保存菌种。本细菌冻存液操作简单，只需把待保存的细菌沉淀用细菌冻存液重悬即可。如果每个菌种共保存250微升，一个包装的细菌冻存液可以保存200个细菌样品。

注意事项：
1. 细菌冻存液必须在超净台内使用，以避免杂菌污染。
2. 细菌冻存液必须和细菌混匀，否则细菌冻存液无法起到在低温冷冻条件下对细菌的保护作用。
3. 新鲜的对数期细菌冻存效果最好，但非对数期的或不是新鲜培养的细菌也可以用本细菌冻存液冷冻保存。

储存条件：-20℃，有效期一年。

·封闭液(用TBS配置，含曲拉通X-100)
编号：YT876
英文名称：Blocking Buffer(TBS)
规格：100ml
本品是最新一代的快速高效封闭液，总体效果显著优于传统的基于BSA(牛血清白蛋白)、脱脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封闭液及国外同类产品，可以用于Western blot (WB)、Immunofluorescence (IF)、Immunohistochemistry (IHC)、Immunocytochemitry (IC) 等实验中的封闭、一抗或二抗的稀释。本产品配制在TBS中，含有适当浓度Triton X-100。 按照每张膜封闭需要5-10ml封闭液计算，一个包装的本产品 可以封闭10-20张膜。

本封闭液快速高效。封闭时间通常仅需5-15分钟，并且和BSA、脱脂奶粉、酪蛋白等传统封闭液以及国外同类的快速 封闭液相比，显示出更强的信噪比(参考下图)。

本封闭液封闭后背景极低。本封闭液不含血清和白蛋白，确保极高的信噪比。

本封闭液兼容性好，兼容辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶和生物素标记的二抗。本产品中添加了不影响HRP和AP活性的防腐剂，不会干扰HRP或AP标记二抗的检测。同时本产品不含生物素，不会干扰基于生物素的检测。

本封闭液使用灵活。本产品配制在含有适当浓度Triton X-100的TBS中，可以直接用于相关实验，但也可以根据实验需要自行添加Tween-20或Triton X-100 至终浓度为0.05%-0.1%后用于封闭、一抗或二抗的稀释。

本产品与BSA及国外同类产品的封闭效果对比参见下图。在相同样品和实验条件下，仅封闭液及封闭时间存在如下图所示的差异时，我公司的本封闭液封闭后的整体背景明显低于BSA封闭后的背景，而且目的条带亮度明显高于国外同类品牌产品。


每组实验从左到右依次为：5μl蛋白Marker，2.5μg蛋白量的HeLa细胞裂解液，5μg蛋白量的HeLa细胞裂解液。请注意对于抗体A，本封闭液比BSA和国外同类产品具有更低 的背景，并且和国外同类产品相比信号明显更强。对于抗体B，本封闭液比BSA具有更低的背景，和国外同类产品相比信号明显更强。实际实验结果会因样品、抗体、实验条件等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

注意事项：
1. 本产品推荐仅使用一次，重复使用可能会导致封闭效果下降。但对于一些信噪比很高的一抗，例如一些内参抗体，本封闭液可以重复使用2-3次。回收的封闭液请勿与未使用 过的封闭液混合。
2. 通常本产品用于PVDF膜及NC膜时的封闭时间为5-15分钟。对于一些背景非常高的抗体，可以尝试将封闭时间延长为30-60分钟。此外，如有特殊需要，也 完全可以4℃封闭过夜。
3. 由于没有任何一种封闭液是适用于所有实验体系的，因此对于一些特殊的实验，可能需要根据具体情况考虑使用其它更合适的封闭液。
4. 取放PVDF膜和NC膜应使用平头镊子，并仅轻轻夹取其边角，操作过程须避免膜表面产生划痕、折痕或压痕等痕迹。
5. PVDF膜一经浸润和活化，需一直保持湿润，根据Western进行到的具体步骤可放置于western转膜液或洗涤液等适当溶液中，否则可能会产生难以封闭的异 常背景。

储存条件：4℃，有效期一年。


YT027型基因定点突变试剂盒特价促销关键词：基因定点突变试剂盒,Site-directed Gene Mutagenesis Kit,YT027


·生物素标记YY1凝胶迁移探针(0.2μM)
编号：YT265
英文名称：Biotin-labeled YY1 Probe For EMSA
规格：200μl
本探针是用于EMSA(也称gel shift)研究的并经生物素(Biotin)标记的YY1 consensus oligonucleotide。这个生物素标记的双链寡核苷酸含有公认的YY1结合位点，可以用作EMSA研究时的探针。一个包装的生物素标记探针可以进行约200-400个样品的EMSA检测。

YY1 consensus oligo的序列如下：
5"-CGC TCC CCG GCC ATC TTG GCG GCT GGT-3"
3"-GCG AGG GGC CGG TAG AAC CGC CGA CCA-5"

本生物素标记EMSA探针已经过纯化，可以直接用于EMSA结合反应。本生物素标记EMSA探针可以和百奥莱博的化学发光法EMSA试剂盒(YT190)配套使用。

注意事项：
1. 避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于基于生物素标记的EMSA检测的详细操作可以参考百奥莱博的化学发光法EMSA试剂盒(YT190)的使用说明。

储存条件：-20℃，有效期一年。


·Hoechst 33258染色液
编号：YT893
英文名称：Hoechst 33258 Staining Solution
规格：10ml|50ml
本Hoechst 33258染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。

Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。

Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。

CAS：23491-45-4
分子式：C25H24N6O·3HCl
分子量：533.88

注意事项：
1. 本Hoechst 33258 染色液的浓度经过百奥莱博的优化，确保可以满足各种常规染色的需要。如需使用特定浓度的Hoechst 33258，请选购百奥莱博的Hoechst 33258(YT892)。如需染色活细胞或培养的组织，请选购百奥莱博的Hoechst 33342活细胞染色液(100X) (YT896)，效果更佳。
2. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。活细胞或组织染色后宜立即观察。
3. 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。抗荧光淬灭封片液(YT097)可以向百奥莱博订购。

储存条件：-20℃避光，有效期一年。


YT027型基因定点突变试剂盒特价促销关键词：基因定点突变试剂盒,Site-directed Gene Mutagenesis Kit,YT027

ARB11896 人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)酶免分析 Human phospho protein kinase c,p-pkc ELISA KIT
64-86-8 秋水仙碱 Colchicine
ARB11587 人基质裂解素(ST3)免费代测 Human stromelysin-3,st3 ELISA KIT
BTN80401 柱式OLIGO回收试剂盒 Column OLIGOBACK
ARB12123 大鼠可溶性瘦素受体(sLR)elisa检测操作说明书 Rat leptin soluble receptor,slr ELISA KIT
ARB11234 人细胞凋亡抑制因子(IAP)Elisa分析 Human inhibitor of apoptosis,iap ELISA KIT
ARB10707 人多功能蛋白聚糖(VS)elisa检测 Human versican/pg-m/pg-350,vs ELISA KIT
PY02-052 MH(B)培养基 250克
1,4-双(5-苯基-2-恶唑)苯 Carboxypeptidase A 1806-34-4
ARB12121 大鼠可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)Elisa方法检测 Rat soluble receptor activator of nuclear factor-kb ligand,srankl ELISA KIT
磷霉素钠 dATP,2Na 26016-99-9
ARB11509 人脂磷壁酸(LTA)酶免分析 Human lipoteichoic acids,lta ELISA KIT
BTN130657 无机焦磷酸酶,热稳定 Inorganic Pyrophosphatase,Thermostable
ARB10130 人N端外显肽(Ext-N)免费代测 Human n-terminal extein,ext-n ELISA KIT
2-氨基-1-苯乙醇 Phenyl Sepharose 6 Fast Flow (High sub) 7568-93-6
ARB13603 兔子表皮生长因子(EGF)含量分析 Rabbit epidermal growth factor,egf ELISA KIT
ARB12293 大鼠抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISA代测服务 Rat anti-cardiolipin antibody igm,aca-igM ELISA KIT
SJ0009 3-氨基-1,2,4-三氮唑 3-Amino-1,2,4-triazole

北京百莱博科技有限公司是基因结构和功能产品的专业生产供应销售商，恭候您的咨询选购YT027型基因定点突变试剂盒特价促销。