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上海一基实业有限公司
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4222-20-2
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文献和实验嘧啶核苷(3H-TdR)掺入率测定T细胞的增殖水平。二、仪器、材料及试剂1、Beckman LS-9800型液体闪烁计数仪,或Beckman LS 6500型液体闪烁计数仪。2、多头细胞收集仪。3、3H-TdR(比活性为2Mci~10Mci/mg分子)。3H-TdR工作液:将1Mci/ml溶液以生理盐水稀释成100μci/ml,于4℃保存备用。临用时再用培养液稀释成10μci/ml溶液。3H-TdR一般临用时稀释。4、闪烁液:PPO(2,5-二苯基恶唑)、POPOP(1,4-双-2-15-苯基恶唑苯
或采用二氧六环作溶剂时,因为这种闪烁液淬灭作用大,为改善计数效率,加入抗淬灭剂萘是十分重要的。萘也是一种荧光物质,它可以抵消一部分淬灭作用,但是萘不能和对联三苯合用,尤其是在甲苯、二甲苯溶剂中,否则计数效率很低。液体闪烁计数器中,闪烁液的最佳体积可以在一定范围内有所变化,吸要能获得较高的计数效率,就应该采用较少的体积,尤其对于3H样品来说,较小体积的闪烁液还可以减少本底计数(大约0.5cpm/ml闪烁液),减少样品的自吸收。如果当样品中含有淬灭剂成分时,增加闪烁液的体积,可以经稀释作用来减少淬灭
(3000rpm),20min,充上清,以x ml生理盐水溶解沉淀,再逐滴加饱和硫酸铵x/2ml。 ↓置4℃3h以上,[此时,(NH4)2SO4的饱和度为33%] 重复上述第二步过程1~2次。末次离心后所得沉淀物为γ-球蛋白,以0.02% mol/L pH7.4PBS溶解至x ml装入透析袋。 ↓对PBS充分透析、换液3次,至萘氏 试剂 测透析外液无黄色,即无NH4+为止。
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