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文献和实验。加入甘氨酸可以消除甲醛使交联反应终止。1.1.准备两个长满细胞的150cm2的细胞培养皿(1*107-5*107 个细胞/皿)。将甲醛直接滴入PBS洗过的细胞培养皿中,使其终浓度为0.75%,然后在室温缓慢旋转10分钟,使蛋白和DNA发生交联。1.2 加入甘氨酸使其终浓度为125mM,在室温晃动孵育5分钟。1.3 使用10ml预冷PBS清洗细胞2次1.4 使用细胞刮将细胞收获放入 5ml 预冷PBS中,并转入50ml的管子。1.5.在皿里加入3mlPBS,将剩余的细胞转移到50ml管子里1000g
抗体,荧光标记二抗,乙醇丙酮混合液(1:1)二、实验器械1、培养皿2、培养瓶3、直剪和眼科剪4、眼科镊5、玻璃滴管6、15ml离心管7、200目网筛三、实验流程取材↓取皮片,削成厚度为0.5mm的皮片↓皮片浸泡在75%酒精中消毒↓1 × PBS (pH 7.4 )清洗皮片两遍↓皮片剪成(3-5)mm×(10-15)mm大小↓置于消化液中4℃消化过夜↓剥去表皮,并刮去真皮下的其他组织↓将组织块剪成1mm3 左右↓加入消化液,37℃消化至消化液浑浊↓停止消化,悬液过200目网筛↓收集细胞悬液,800
的 Matrigel 在 4°C 下过夜解冻,在 6 孔板的每孔滴加 1ml 冷的 Matrigel,旋动 6 孔板使 Matrigel 溶液分布均匀。随后转移至 37℃ 条件下孵育 10min 使其凝固,使用前需室温静置 1h。 2、将 hPSCs 接种在包被 Matrigel 的 6 孔板中,每孔加入 3ml mTeSR1,放置在 37℃,5%CO2 的培养箱中,培养至细胞汇合度约为 75-85%、且大部分无分化的状态时,吸出培养基。 3、向 hPSCs 中加入1ml Dispase(1mg/ml),并将培养
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