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文献和实验浅析染色质免疫沉淀(ChIP)技术在 DNA 与蛋白质相互作用研究中的重要性
-19]; xChIP:用来研究DNA及低结合力蛋白,采用甲醛或紫外线进行 DNA 和蛋白交联,超声波片段化染色质,然后进行片段富集及后续分析,适用于多数非组蛋白的蛋白,例如 [9, 15, 20]。 X-ChIP 试验的一般过程 以上两种方法在分离 DNA-蛋白质复合物之后,对 DNA 进行 PCR 扩增,验证目标序列的存在。除验证实验外,ChIP DNA也可以进行测序分析,这种方法被称为 ChIP-seq [22] ;也可做芯片分析,这种方法被称为 ChIP on CHIP 或 ChIP
加药,或两小时,或半天时间,但我们常在前一天下午铺板,次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个,否则难以反应真实情况3.5%CO2,37℃孵育16-48小时,倒置显微镜下观察。4.每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4h。若药物与MTT能够反应,可先离心后弃去培养液,小心用PBS冲2-3遍后,再加入含MTT的培养液。5.终止培养,小心吸去孔内培养液。6.每孔加入150ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解。在酶联
MTT溶液20 ul/孔,继续培养4 h,然后加入上述三联液100 ul/孔,于37度放置过夜后,用酶标仪测各孔A570值。 优点:简化操作,提高了可靠性。 解决方法2:日本同仁有一种新试剂CCK-8试剂, CCK-8试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为:该试剂中含有WST–8[其化学名称为:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐],它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲
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