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- 天津
- LDS1075
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温保存
- 保质期：
2 年
- 库存：
大量供应
- 供应商：
上海研谨生物
- 规格：
200ml/瓶
产品编号：LDS1075
产品名称：人全血单个核细胞分离液（FICOLL配置）
产品规格：200ml/瓶
产品价格：￥400.00元
本品用于分离人全血单个核细胞
人全血单个核细胞分离液说明书
【包装规格】
200ml/瓶
【实验前准备】
适用仪器：最大离心力可达 1200g 的水平转子离心机
【检验方法】
全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。
首先根据样本量大小，分以下几种情况：
一、 使用 15ml 离心管时：
情况 A：血液样本量小于 3ml 时，实验方法如下：
- 取一支 15ml 离心管，加入 3ml 分离液。
- 用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，400-650g，离心 20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。
- 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色单个核细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。
- 用吸管小心吸取第二层环状乳白色单个核细胞层到另一 15ml 离心管中，向所得离心管中加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。
- 250g，离心 10min。
- 弃上清。
- 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。
- 250g，离心 10min。
- 重复 6、7、8，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。
情况 B：血液样本量为 3-6ml 时，实验方法如下：
- 取一支 15ml 离心管，先加入与血液样本等量的分离液。
- 用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，400-650g，离心 20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果，但最大离心力最好不超过 1000g）。
- 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色单个
核细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。
- 用吸管小心吸取第二层环状乳白色单个核细胞层到另一 15ml 离心管中，向所得离心管中加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。
- 250g，离心 10min。
- 弃上清。
- 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。
- 250g，离心 10min。
- 重复 6、7、8，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。
二、 使用 50ml 离心管时：
情况 A：血液样本量为 6-10ml 时，实验方法如下：
- 取一支 50ml 离心管，先加入与血液样本等量的分离液。
- 用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，500-950g，离心 20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果，但最大离心力最好不超过 1200g）。
- 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色单个核细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。
- 用吸管小心吸取第二层环状乳白色单个核细胞层到另一 15ml 离心管中，向所得离心管中加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。
- 250g，离心 10min。
- 弃上清。
- 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。
- 250g，离心 10min。
- 重复 6、7、8，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。
情况 B：血液样本量为 10-20ml 时，实验方法如下：
- 取一支 50ml 离心管，先加入与血液样本等量的分离液。
- 用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，650-110g，离心 20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果，但最大离心力最好不超过 1200g）。
- 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色单个
核细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。
- 用吸管小心吸取第二层环状乳白色单个核细胞层到另一 15ml 离心管中，向所得离心管中加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。
- 250g，离心 10min。
- 弃上清。
- 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。
- 250g，离心 10min。
- 重复 6、7、8，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。
分离图例
【注意事项】
- 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最好在取血 2h 内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。
- 本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。
- 吸取过多的单个核细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。
- 吸取过多的单个核细胞层上层溶液会导致血浆蛋白及血小板混杂。
- 如所实验后细胞得率或活性过低，请联系上海研谨生物技术以寻求支持帮助。
- 当血液样本粘度过高需稀释时，最优稀释方法：将血液与样本稀释液（产品编号：2010C1119）1:1 稀释混匀备用。注：不当的稀释方法会降低细胞得率及活性。如血液样
本经过稀释则分离过程中需适当降低离心力和离心时间。
【储存条件及有效期】
常温保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启
封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
【参考值（参考范围）】
本实验淋巴细胞提取率及纯度均大于 80%。
下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。
| 红细胞 | 白细胞 | 血小板 | |||
| （4.0-10.0）×109 | |||||
| （4.0-5.5）×1012 | （1.0-3.0）×1011 | ||||
| 含量（个/L） | 中性粒细胞 | 淋巴细胞 | 单核细胞 | ||
| 50%-70% | 20%-40% | 3%-8% | |||
| 【相关实验技术方案】 | |||||
- 所获得淋巴细胞的培养技术。
- 所获得淋巴细胞的核酸提取技术。
- 所获得淋巴细胞的鉴定方法A.流式细胞技术B.免疫组化技术C.原位杂交技术
D.PCR 技术
【可能存在的问题及解决方法】
1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：
| 出现情况 | 出现原因 | 建议解决方案 |
离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层 转速过小或离心时间过短 适当增减转速
| 离心后目的细胞存在于分离液中 | 转速过大或离心时间过长 | ||
| 离心后白环层弥散 | 细胞密度过大 | 调整细胞密度 | |
| 离心后白环层太浅或看不见 | 细胞密度过小 | ||
- 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。
- 本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可
能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。
注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以 50-100g 为基数，直至达到最佳分离效果，离心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。
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- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验到离心机，500 g 离心 25 min。 小心取出离心管，吸取中间层的白色薄膜层，即为单个核细胞。 用 10 mL PBS 洗涤获得的单个核细胞，250g 离心 10 min，弃上清。 重复洗涤一次。 用细胞染色缓冲液重悬细胞备用。 注意事项： Ficoll 使用时的温度很重要，温度太高或者太低都会影响分离效果。 血液样本最好为新鲜抗凝血（采血 2 h 以内），为保持细胞活力，应避免冷冻和冷藏。 3.50 mL 离心管离心效率比 15 mL 离心管差，为了获得最大量的单核细胞，最好用15
分离开来。 Ficoll密度梯度离心法是分离、纯化PBMC最常用的方法。Ficoll是蔗糖的多聚体，中性，平均分子量400000，当密度为1.2g/mL，未超出正常生理性渗透压，也不穿过生物膜，故常用作PBMC分离的分离液。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分离液比重，离心后漂浮于分离液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分离液中。吸取分层液液面上的白膜层细胞，并进行适当的清洗，就可从外周血中分离到较高纯度的单个核细胞，即PBMC。 2 方法 1） 取新鲜抗凝
Ficoll （2）取抗凝外周血（全血）与无菌 PBS 按照 1:1 充分混匀，用移液管沿管壁缓慢叠加于分层液面上，动作一定要轻，注意保持清楚的界面。外周血，PBS，淋巴细胞分离液最终体积比为 1:1:1。 （3）水平离心 400 g 成×30 分钟（可根据淋巴细胞分离液 Ficoll 或离心机转子要求调整） （4）离心后可看见管内分为三层，上层为血浆和 PBS，下层主要为红细胞和粒细胞，中层为淋巴细胞分离液。在上、中层界面处有一以单个核细胞为主的白色云雾层狭窄带，主要就是单个核细胞，包括淋巴细胞与单核
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