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- 2025年07月13日
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上海一基实业有限公司
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676596-65-9
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文献和实验主要方法。林一贝(Lineweaver—Burk)氏根据米—曼氏方程式又推导如下方程式： 以不同的底物浓度1/[S]为横坐标1/v为纵坐标，按直线回归方程计算，作图，并向纵轴方向延长，此线在横轴上截距为1/Km的负值。 本实验以碱性磷酸酶为例，选择不同浓度的磷酸苯二钠为其底物，磷酸苯二钠被AKP水解后，生成酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4—氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化生成红色醌的衍生物，根据红色的深浅可测出酶活力高低，其反应式如下
碱性磷酸酶检测法（ AKP 法） 1． 按 MTT 法用细胞因子处理靶细胞适当时间，用 PBS 洗去死亡细胞，洗两次。 2． 向 96 孔细胞培养板各孔中加 0.2ml 新鲜配制的底物液（ 0.2mol/L 硼酸， 1mmol/L MgCl2 ， 1.2mmol/L 甲伞基磷酸）。在 37 ℃ 5 ％ CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养 3 小时。 3． 在荧光计数仪上测定荧光的量。根据测定已知
1．组织前处理 （1）固定：组织以10%中性福尔马林液或Bouins液固定，常规石蜡包埋，切片厚4～6μm，粘附于涂有粘附剂的玻片上，入烤箱60～80℃6～8h，使切片更紧贴玻片。 （2）脱蜡：二甲苯10min ×2，自100%乙醇，90%，70%，50%，30%各5min。入PBS（含5mmol/l MgCl2,pH7.3～7.4）10min×2。入0.2n HCl 20min以进一步去除蛋白。 （3）50℃2×SSC，含5mmol/l
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