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TOSOH
使用Toyopearl 和TSK-GEL离子交换树脂填料时常用水溶性缓冲体系,其pH值在目标蛋白的等电点(pl)和树脂填料的解离常数(pKa)之间。实际层析过程中,蛋白质洗脱是通过提高缓冲溶液的盐浓度,或者缓冲溶液自身的pH值变化来实现的。强离子交换作用使得IEC树脂填料具有非常高的动态吸附载量(DBC),这使得离子交换树脂填料可以理想地用于纯化工艺中的任一步骤,尤其更多地被用于捕获步骤。
Toyopearl离子交换填料的基质是聚甲基丙烯酸树脂,化学稳定性好、机械强度大、流速快, 耐压高,特别适合大规模制备的应用。
应用
蛋白、单克隆抗体、血液制品、核酸、寡核苷酸、病毒、胰岛素
离子交换基团
Toyopearl和TSKgel PW型离子交换有6种不同的离子交换基团:
3种为阴离子交换 -Q、QAE、DEAE
3种为阳离子交换 -S、SP、CM
阳离子交换填料: 阴离子交换填料:
TOYOPEARL GigaCap S-650M TOYOPEARL GigaCap Q-650M
TOYOPEARL SP-650S,M,C TOYOPEARL SuperQ-650S,M,C
TOYOPEARL SP-550C TOYOPEARL DEAE-650S,M,C
TOYOPEARL CM-650S,M,C TOYOPEARL QAE-550C
TOYOPEARL MegaCap II SP-550EC
**S=20-50um; M=40-90 or 50-100um; C=50-150um; EC=100-300um
吸附载量
第二、三代基团修饰方式显著提升Toyopearl离子交换填料的吸附载量,并减小洗脱体积。
高载量填料:Toyopearl SuperQ-650、TSKgel SuperQ-5PW
超高载量:Toyopearl GigaCap S-650
Toyopearl GigaCap CM-650
Toyopearl GigaCap Q-650
耐碱性
Toyopearl GigaCap系列离子交换填料在碱性环境下具有优良的稳定性。
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文献和实验离子交换层析原理 离子交换层析是根据生物分子的带电荷差异进行分离的一种吸附性层析。当生物分子通过离子交换层析介质的时候,带电荷的分子和层析填料上的相反电荷之间产生静电吸附,这是一种可逆的相互作用,在使用缓冲液洗脱时,不同电荷数量的生物分子,其洗脱缓冲液的浓度不同,从而使生物分子通过离子交换层析介质后得到分离的效果。 特点 介质种类繁多,具有高选择性 pH是离子交换层析至关重要的参数,pH的不同会导致整个实验结果的差异 操作简单,易于控制 属于吸附性层析,通常载量很高,具有浓缩作用 洗脱
择离子交换层析...... 遇到这些问题别担心,「纯化密卷」来帮忙!! 在这份 CIPP(Capture, Intermediate purification,Polishing,层析策略)纯化密卷中,我们对大家纯化过程中遇到的常见问题,一一做出了解答,更有九大层析策略,让专业的人帮你搞定一切困难~ 生物分子间的分离纯化主要依据分子间在物理和化学性质上的差异来实现的,包括大小、电荷、疏水和极性等,部分蛋白还具有特殊的亲和特性。另外,可以综合利用多种不同的性质差异,采用特殊的「多模式填料
及LambdaFabSelect的填料分别作用于Kappa类型和Lambda类型轻链抗体的轻链稳定区,可用于包含相关区域的抗体片段的纯化 (表10)。 表10 常见抗体及抗体片段纯化填料类型及其特点 族特异亲和填料 某些配基可以与某类生物分子发生特异的亲和作用。将这些配基偶联到填料之上,便形成了族特异性填料。如果涉及细胞因子、白蛋白、糖蛋白之类样品的分离纯化时,除了常用的离子交换层析和凝胶过滤层析之外,族特异性亲和填料也是一种选择 (表11)。 表11 常见组特异性亲和填料及其能结合的分子 3. 预活化填料 目的
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