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- DSMZ细胞
- 美国/德国/日本
- ACC--1077
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-80℃冻存
- 保质期：
二年
- 英文名：
BT-474（BT474）
- 库存：
20
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 规格：
1x10^6 cells
细胞英文(简称）:BT-474（BT474）
细胞来源: ATCC DSMZ JCM ECACC
代次:P3
规格:T25
细胞数:1x10^6 cells
组织来源:乳腺导管癌
细胞形态:贴壁；上皮细胞样
细胞活力:95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测:细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件:DMEM(高糖) +10% FBS；37℃，5% CO2
传代方法:建议:1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件:完全培养基50%+40%FBS+10%DMSO
传代细胞培养操作步骤
1、 37度水浴加热所有试剂。
2、 吸取培养培养皿内旧培养液，放置一个干净离心管内。（为稍后终止消化作准备。）
3、 用PBS清洗培养皿，弃去。
4、 向瓶内加入消化液（胰蛋白酶液）。以能覆盖培养瓶底为宜。（一般一个大皿1ml）
5、 2-5分钟后，轻轻震荡培养皿。使BT-474（BT474）人乳腺导管瘤细胞从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清（即原培养液）终止消化。
6、 收集细胞悬液，880转/分、5分钟离心，弃去上清液。
7、 加培养液至1ml，混匀后取10ul计数细胞。
8、 根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中，再加入相应体积的培养液。（90mm大皿是9ml，中皿好像是4mm，6孔板和小皿是2ml，96孔板是100ul）。
9、 接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈，使细胞排列均匀。
10、 放入暖箱中继续培养。
细胞计数步骤：
1、将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板上.
2、将细胞悬液吸出少许，用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)
3、镜下观察，计算计数板八大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：
细胞数/ml＝8大格细胞总数/ 8×2×10000
细胞冻存与复苏：
BT-474（BT474）人乳腺导管瘤细胞冻存和复苏的原则：慢冻快融
当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。
如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
1．冻存细胞
（1）选对数增生期细胞，在冻存前1d换液。
（2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×106／m1左右密度，离心，去上清。
（3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％二甲基亚砜(DMSO) 或甘油，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤
（4）分装于无菌冻存管中，每管加1.5m1悬液。
（5）旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，作好标记。
（6）冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-1℃／min的速度,在30～40 min时间内,下降到液氮表面，再停30 min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。
标准程序：
当温度在-25℃以上时， 1～2℃/min
当温度达-25℃以下时， 5～10℃/min
当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中
简易程序：
将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1～2℃的速度，在40分钟内降至液氮表面，停30分钟后，直接投人液氮中。
操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。
2. 复苏细胞
（1）从罐中取出冻存管。
（2）迅速放入37℃水浴，不时摇动，使其急速融化，30～60s内完成。
（3）冻存管用70％酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。
（4）BT-474（BT474）人乳腺导管瘤细胞低速离心(880r／min) 5 min，去上清后再用培养液洗一次。
（5）用培养液适当稀释后，装入培养瓶37℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。
冻存细胞数量要充分，密度应达到107／m1，在融后稀释20倍后，仍能保持5×105／m1数量。
| DSMZ细胞库 | ACC 305 | 293 | ACC 296 | A4-1025 | ACC 50 | OPM-2 | ACC 444 | FU-OV-1 | ACC 582 | OCI-AML3 |
| DSMZ细胞库 | ACC 486 | PR-1 | ACC 279 | BHT-101 | ACC 337 | MHH-CALL-4 | ACC 577 | SU-DHL-16 | ACC 200 | COLO-824 |
| DSMZ细胞库 | ACC 343 | SGE-1 | ACC 248 | COLO-677 | ACC 666 | UPCI-SCC-111 | ACC 167 | MHH-ES-1 | ACC 619 | OCI-M2 |
| DSMZ细胞库 | ACC 352 | RTG-2 | ACC 414 | 647-V | ACC 375 | KYSE-150 | ACC 576 | SU-DHL-10 | ACC 275 | CRO-AP3 |
| DSMZ细胞库 | ACC 205 | 2M6 | ACC 498 | KCI-MOH1 | ACC 667 | UPCI-SCC-072 | ACC 440 | CAL-85-1 | ACC 433 | EVSA-T |
| DSMZ细胞库 | ACC 624 | TA-85B5 | ACC 673 | LAN-5 | ACC 570 | CI-1 | ACC 432 | 8-MG-BA | ACC 291 | U-138-MG |
| DSMZ细胞库 | ACC 238 | PSI-2 | ACC 344 | TFK-1 | ACC 348 | KYSE-140 | ACC 528 | OCI-LY-19 | ACC 670 | UPCI-SCC-090 |
| DSMZ细胞库 | ACC 329 | JTC-15 | ACC 55 | A-498 | ACC 599 | BEN-MEN-1 | ACC 341 | MHH-CALL-2 | ACC 360 | CGTH-W-1 |
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文献和实验「癌细胞」：是我杀了我？PNAS 这项研究竟让肿瘤自己杀死自己
）具有相似的分子特性。 图片来源：PNAS BT474 作为 HER2 阳性肿瘤模型 为了确定用于旁分泌研究的最佳肿瘤模型，研究人员评估了两种 HER2 阳性肿瘤细胞系（SKOV3ip 和 BT474）的 HER2 水平，转导效率，抗体表达水平和 TZB 敏感性。结果发现相对于对照细胞系，HER2 水平在 BT474 细胞系中最高。天然腺病毒受体水平在对照 HEK293 细胞中最高，在 A549 和 BT474 细胞中分别降低 57% 和 67%，而在 SKOV3ip 中最低。体外转导效率方面，BT474
【思路解读】一篇 10 分 SCI 文章，教你入手「铁死亡」的国自然课题设计思路
对「铁死亡」的抗性是 PI3K-AKT 信号通路激活的结果，研究者通过药理学手段抑制了该通路，发现 PI3K 抑制剂 GDC-0941 和 AKT 抑制剂 MK-2206 均使 BT474 和 MDA-MB-453 细胞（均具有该通路的激活突变）对「铁死亡」敏感，表明 PI3K-AKT-mTOR 通路的持续激活可保护癌细胞免受细胞「铁死亡」。 图片来源：参考文献 5 Figure 1 2. mTORC1，而不是 mTORC2，可以抑制「铁死亡」 mTOR 信号传导可经由 mTORC1/mTORC2
人类组织肿瘤细胞 10104 人淋巴瘤细胞(B类)A-204 人横纹肌肉瘤A375 人皮肤黑色素瘤细胞A431 人皮肤基底细胞癌A549 人肺癌细胞A875 人黑色素瘤细胞BeWo 人胎盘绒毛癌细胞BGC-823 人胃腺癌细胞BT474 人乳腺导管瘤CACO-2 人结肠癌细胞CaLu-3 人肺腺癌细胞CASKI 人宫颈癌Colo205 人结肠癌Colo320DM 人结肠癌D341 Med 人髓母细胞瘤Daudi 人B淋巴细胞瘤DMF7 双位点HC-KIT
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