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赫澎(上海)生物
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文献和实验【 实验目的 】 掌握定磷法测定核酸含量的原理和方法 【 实验原理 】 核酸分子结构中含有一定比例的磷(RNA含磷量约为8.5%~9.0%,DNA含磷量约为9.2%),测定其含磷量即可求出核酸的量。 核酸分子中的有机磷经强酸消化后形成无机磷,在酸性条件下,无机磷与钼酸
核酸的定量测定——定磷法 [原理] 磷的测定方法很多,Fiske-Subbarow定磷法是一经典的但至今仍被经常采用的方法,它具有灵敏、简便的特点。各种含磷有机物经硫酸或过氯酸水解,使有机磷消化成为无机磷。无机磷在酸性条件下,与钼酸盐(常用钼酸铵或钼酸钠)反应生成磷钼酸盐络合物。用还原剂处理,磷钼酸盐络合物被还原生成钼蓝,在660nm处有最大光吸收峰。在一定浓度范围内,颜色的深浅与磷含量成正比关系。因此可应用
一、反应曲线 首先,我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图,可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,如下图所示: 二、反应原理 对于延迟区来讲,无规律可寻,对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法,是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点,并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等,此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
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