- ￥1850
- 赫澎生物
- 上海
- HEPENGBIO-TG769
- 2025年09月28日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
干燥密封保存
- 库存：
99
- 供应商：
赫澎（上海）生物
货号：HP2560
规格：20ml/60ml
产品组成:
HP2560-01(20次) HP2560-02（60次）
pGM-T Vector（50 ng/μl） 20 μl 60 μl
T4 DNA Ligase（3 U/μl） 20 μl 3×20 μl
10×T4 DNA Ligation Buffer 30 μl 3×30 μl
2×T4 DNA Rapid Ligation Buffer 100 µl 3×100 µl
Control Insert DNA（700 bp） (50 ng/μl） 10 μl 10 μl
ddH2O 1 ml 1 ml
保存条件：
感受态细胞需要严格的在-70℃冻存，DNA产物纯化试剂盒室温保存。其余的试剂于-20℃保存，避免反复冻融（载体和连接试剂可以适当的分装成小份，防止反复冻融，以保证质量）。
TOP10基因型
- ,mcrA Δ(mrr-hsd RMS-mcr BC)φ80,lacZΔM15,Δlac X74,recA1araΔ139 Δ(ara-leu) 7697,galUgalK,rps,L (Strr) endA1,nupG
pGM-T是一种高效克隆PCR产物的专用载体，它是由一种克隆载体在EcoRV酶切位点处切开，在两侧的3’端添加T而成。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR产物的3’端添加一个A，可与pGM-T 3’端的T互补连接，因此可大大提高PCR产物的连接和克隆效率。连接使用的PCR片段3’端应带有A末端，如果是使用pfu等高保真聚合酶扩增的不带A末端的片段，应使用平末端连接试剂盒先加A末端后再连接。
试剂盒中按不同需要分别配备了高效率的连接试剂、对照用超螺旋质粒和TOP10感受态细胞等，可以方便的连接和转化。带有插入片段的重组子可根据α互补原理，进行蓝白斑筛选，判断载体中有无外源基因的插入（白色克隆为阳性重组克隆，蓝色的为载体自连的克隆，具体筛选原理参考分子克隆等书籍）。克隆后，可使用通用引物T7、SP6进行测序。
使用方法：（以下的步骤请在无菌条件下操作）
- 平末端连接从此步骤开始，如片段3’末端带有A，则跳过步骤1、2，直接从步骤3开始。使用高保真聚合酶扩增的平末端产物应先使用DNA产物纯化试剂盒进行纯化 （如果PCR
2.向纯化后的平末端DNA片段3’末端加A，具体的反应体系参见下表
| 组成成分 体 积 | |
| 平末端DNA片段 | 15 μl |
| Tailing-A Reaction Buffer | |
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验飞的 GeneArt™ Gibson Assembly® 克隆试剂盒系列为例，Gibson Assembly 实际上是生命科学狂人文特尔（就是那个敢单挑 6 国合力的国际人类基因组计划还占尽上风，逼得当时美国总统出面协调让双方合作并同时发表结果的）东山再起后成立的 Venter 研究所旗下 Gibson 博士开发的，里面包含了精心优化搭配的三种酶活性：外切酶会外切双链末端而产生单链 3’突出端，使得外源片段和线性化载体的互补末端能够退火，聚合酶活性会填补退火片段产生的缺口，连接酶活性能够在重组后进行连接。得到
3`-T突出端的载体用于直接高效地连接PCR产物。系统中也包含感受态细胞和S.O.C培养基, 使得实验操作更为简单方便。所以TA克隆不需使用含限制酶序列的引物，不需将PCR产物进行优化，不需把PCR产物做平端处理（Invitrogen另有平端载体供高确限度酶克隆）。不需在PCR扩增产物上加接头，即可直接进行克隆。图32 The TA Cloning® ConceptTopo TA克隆方法（Topo TA Cloning Kit）Topo TA克隆原理与TA克隆一样，唯一不同的是TA克隆用的是T4连接酶
） 利用Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，在每条PCR 扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端。Invitrogen公司TA克隆 系统和Topo TA克隆 系统都提供一个线性含3`-T突出端的载体用于直接高效地连接PCR 产物。系统中也包含感受态细胞和S.O.C培养基, 使得实验操作更为简单方便。 所以TA克隆 不需使用含限制酶序列的引物，不需将PCR 产物进行优化，不需把PCR 产物做平端处理（Invitrogen另有平端载体供高确
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
