pGM-T克隆试剂盒（含载体，连接酶，感受态细胞）

pGM-T载体试剂盒

货号：HP2560
规格：20ml/60ml
产品组成:
HP2560-01(20次) HP2560-02（60次）
pGM-T Vector（50 ng/μl） 20 μl 60 μl
T4 DNA Ligase（3 U/μl） 20 μl 3×20 μl
10×T4 DNA Ligation Buffer 30 μl 3×30 μl
2×T4 DNA Rapid Ligation Buffer 100 µl 3×100 µl
Control Insert DNA（700 bp） (50 ng/μl） 10 μl 10 μl
ddH2O 1 ml 1 ml
保存条件：
感受态细胞需要严格的在-70℃冻存，DNA产物纯化试剂盒室温保存。其余的试剂于-20℃保存，避免反复冻融（载体和连接试剂可以适当的分装成小份，防止反复冻融，以保证质量）。
TOP10基因型

6. ,mcrA Δ(mrr-hsd RMS-mcr BC)φ80,lacZΔM15,Δlac X74,recA1araΔ139 Δ(ara-leu) 7697,galUgalK,rps,L (Strr) endA1,nupG

产品简介：
pGM-T是一种高效克隆PCR产物的专用载体，它是由一种克隆载体在EcoRV酶切位点处切开，在两侧的3’端添加T而成。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR产物的3’端添加一个A，可与pGM-T 3’端的T互补连接，因此可大大提高PCR产物的连接和克隆效率。连接使用的PCR片段3’端应带有A末端，如果是使用pfu等高保真聚合酶扩增的不带A末端的片段，应使用平末端连接试剂盒先加A末端后再连接。
试剂盒中按不同需要分别配备了高效率的连接试剂、对照用超螺旋质粒和TOP10感受态细胞等，可以方便的连接和转化。带有插入片段的重组子可根据α互补原理，进行蓝白斑筛选，判断载体中有无外源基因的插入（白色克隆为阳性重组克隆，蓝色的为载体自连的克隆，具体筛选原理参考分子克隆等书籍）。克隆后，可使用通用引物T7、SP6进行测序。

使用方法：（以下的步骤请在无菌条件下操作）

1. 平末端连接从此步骤开始，如片段3’末端带有A，则跳过步骤1、2，直接从步骤3开始。使用高保真聚合酶扩增的平末端产物应先使用DNA产物纯化试剂盒进行纯化 （如果PCR

产物中有其它大小的杂片段，则应使用琼脂糖凝胶回收试剂盒进行回收）。

2.向纯化后的平末端DNA片段3’末端加A，具体的反应体系参见下表

组成成分 体 积
平末端DNA片段	15 μl
Tailing-A Reaction Buffer