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- DSMZ细胞
- 美国/德国/日本
- ACC--1288
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-80℃冻存
- 保质期：
二年
- 英文名：
IM-9
- 库存：
20
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 规格：
1x10^6 cells
细胞英文(简称）:IM-9
细胞来源: ATCC DSMZ JCM ECACC
代次:P3
规格:T25
细胞数:1x10^6 cells
组织来源:淋巴
细胞形态:悬浮
细胞活力:95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测:细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件:RPMI-1640 +10% FBS；37℃，5% CO2
传代方法建议:1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件:90%FBS+10%DMSO
传代细胞培养操作步骤
1、 37度水浴加热所有试剂。
2、 吸取培养培养皿内旧培养液，放置一个干净离心管内。（为稍后终止消化作准备。）
3、 用PBS清洗培养皿，弃去。
4、 向瓶内加入消化液（胰蛋白酶液）。以能覆盖培养瓶底为宜。（一般一个大皿1ml）
5、 2-5分钟后，轻轻震荡培养皿。使IM-9、IM9人外周血B淋巴细胞从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清（即原培养液）终止消化。
6、 收集细胞悬液，880转/分、5分钟离心，弃去上清液。
7、 加培养液至1ml，混匀后取10ul计数细胞。
8、 根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中，再加入相应体积的培养液。（90mm大皿是9ml，中皿好像是4mm，6孔板和小皿是2ml，96孔板是100ul）。
9、 接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈，使细胞排列均匀。
10、 放入暖箱中继续培养。
细胞计数步骤：
1、将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板上.
2、将细胞悬液吸出少许，用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)
3、镜下观察，计算计数板八大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：
细胞数/ml＝8大格细胞总数/ 8×2×10000
细胞冻存与复苏：
IM-9、IM9人外周血B淋巴细胞冻存和复苏的原则：慢冻快融
当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。
如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
1．冻存细胞
（1）选对数增生期细胞，在冻存前1d换液。
（2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×106／m1左右密度，离心，去上清。
（3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％二甲基亚砜(DMSO) 或甘油，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤
（4）分装于无菌冻存管中，每管加1.5m1悬液。
（5）旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，作好标记。
（6）冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-1℃／min的速度,在30～40 min时间内,下降到液氮表面，再停30 min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。
标准程序：
当温度在-25℃以上时， 1～2℃/min
当温度达-25℃以下时， 5～10℃/min
当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中
简易程序：
将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1～2℃的速度，在40分钟内降至液氮表面，停30分钟后，直接投人液氮中。
操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。
2. 复苏细胞
（1）从罐中取出冻存管。
（2）迅速放入37℃水浴，不时摇动，使其急速融化，30～60s内完成。
（3）冻存管用70％酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。
（4）IM-9、IM9人外周血B淋巴细胞低速离心(880r／min) 5 min，去上清后再用培养液洗一次。
（5）用培养液适当稀释后，装入培养瓶37℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。
冻存细胞数量要充分，密度应达到107／m1，在融后稀释20倍后，仍能保持5×105／m1数量。
| DSMZ细胞库 | ACC 111 | IEC-6 | ACC 208 | A-S-30D | ACC 561 | RC-K8 | ACC 685 | HD-MAR-2 | ACC 399 | TANOUE |
| DSMZ细胞库 | ACC 556 | NCI-H82 | ACC 636 | DT-40 | ACC 605 | SUP-T11 | ACC 583 | NU-DHL-1 | ACC 383 | EPLC-272H |
| DSMZ细胞库 | ACC 74 | MEL-JUSO | ACC 292 | SF-158 | ACC 153 | FLK-BLV-044 | ACC 472 | CAT-13.0B10 | ACC 90 | WERI-RB-1 |
| DSMZ细胞库 | ACC 330 | JTC-27 | ACC 410 | MFE-280 | ACC 633 | U-2932 | ACC 157 | MHH-NB-11 | ACC 430 | SK-MM-2 |
| DSMZ细胞库 | ACC 254 | BEN | ACC 526 | KASUMI-2 | ACC 517 | HCC-1143 | ACC 572 | SU-DHL-6 | ACC 738 | MDA-MB-468 |
| ECACC细胞库 | 86052701 | 3T3 L1 | 90032601 | CV-1 Clone B5 | 91091816 | SK-HEP-1 | 94122104 | DOK | 6122002 | CHP-134 |
| ECACC细胞库 | 86060301 | SC-1 | 90040512 | LA-4 | 8011101 | Vero (AC-free) | 94122105 | SVCT | 6120601 | KARPAS 231 |
| ECACC细胞库 | 86060302 | LBRM-33-1A5 | 90050801 | MDBK | 91091914 | RT4 | 95010509 | CA46 | 7030901 | H157 |
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文献和实验。如果直接倒掉，离心管内会有残留裂解液，后续加入100 μL PBS重悬细胞时，可能不能完全稀释裂解液，导致红细胞裂解过度。 6. 细胞沉淀重悬，可用枪轻轻吹打，或者用转速小的涡旋仪涡旋。 7. 人血样本建议染CD45，有利于后续数据分析时圈门。 8. 处理人血样本时，推荐设置只染CD45的单染管低速上机用来设置阈值，观察细胞量，圈淋巴细胞群。 9. 人外周血中主要含T淋巴细胞，B淋巴细胞的量较少。如果使用病人的血液样本，B淋巴细胞的量可能更少，因此B淋巴细胞的检测不推荐使用过夜的样本，过夜样本易导致
1． 蔗聚糖――泛影葡胺可使红细胞聚集成串后沉降，及粒细胞沉降，最多用于人外周血单细胞分离，常用400×g，15-30分钟，水平离心； 2． 可用膜滤器除菌，也可用加热高压灭菌； 3． 离心时保持20度效果较为重要，温度过高或过低均影响分离效果； 4． 可用于人外周血、骨髓等分离单个核细胞、E花环、EA细胞分离、肿瘤细胞分离、TIL等分离及死细胞去除等。 二． Percoll分层溶液
恶性肿瘤病人外周血免疫指标的流式细胞仪检测及免疫治疗前后免疫功能变化的研究
恶性肿瘤的发生、发展与机体免疫系统密切相关。运用流式细胞术的方法，检测T淋巴细胞表面抗原（CD3、CD4、CD8），B淋巴细胞表面抗原（CD19、CD20），NK细胞表面抗原（CD16+56）在恶性肿瘤病人外周血中的表达，并检测活化T、B、NK淋巴细胞的免疫指标（CD3/HLA-DR、CD3/CD25）的变化，探讨淋巴细胞在肿瘤中的表达状况及其意义，并进一步分析恶性肿瘤病人免疫治疗前后的免疫功能改变，以致使我们更深一层认识肿瘤在细胞水平的免疫功能。 1、资料与方法 1.1 研究对象
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