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U-118 MG、U-118MG人脑星形胶质母细胞瘤

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  • ¥800 - 2350
  • DSMZ细胞
  • 美国/德国/日本
  • ACC--1524
  • 2025年07月12日
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    • 详细信息
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    • 保存条件

      -80℃冻存

    • 保质期

      二年

    • 英文名

      U-118 MG

    • 库存

      20

    • 供应商

      上海泽叶生物科技有限公司

    • 规格

      1x10^6 cells

    细胞名称:U-118 MG、U-118MG人脑星形胶质母细胞瘤
    细胞英文(简称):U-118 MG
    细胞来源: ATCC DSMZ JCM ECACC
    代次:P3
    规格:T25
    细胞数:1x10^6 cells
    组织来源:脑星形胶质母细胞瘤IV期
    细胞形态:贴壁;混合型
    细胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
    细胞检测:细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
    培养条件:细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
    传代方法建议:1:2-1:3 两天换液一次
    冻存条件:完全培养基50%+40%FBS+10%DMSO
    传代细胞培养操作步骤
    1、 37度水浴加热所有试剂。
    2、 吸取培养培养皿内旧培养液,放置一个干净离心管内。(为稍后终止消化作准备。)
    3、 用PBS清洗培养皿,弃去。
    4、 向瓶内加入消化液(胰蛋白酶液)。以能覆盖培养瓶底为宜。(一般一个大皿1ml)
    5、 2-5分钟后,轻轻震荡培养皿。使U-118 MG、U-118MG人脑星形胶质母细胞瘤从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清(即原培养液)终止消化。
    6、 收集细胞悬液,880转/分、5分钟离心,弃去上清液。
    7、 加培养液至1ml,混匀后取10ul计数细胞。
    8、 根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中,再加入相应体积的培养液。(90mm大皿是9ml,中皿好像是4mm,6孔板和小皿是2ml,96孔板是100ul)。
    9、 接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈,使细胞排列均匀。
    10、 放入暖箱中继续培养。
    细胞计数步骤:
    1、将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板上.
    2、将细胞悬液吸出少许,用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)
    3、镜下观察,计算计数板八大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算:
    细胞数/ml=8大格细胞总数/ 8×2×10000
    细胞冻存与复苏:
    U-118 MG、U-118MG人脑星形胶质母细胞瘤冻存和复苏的原则:慢冻快融
    当细胞冷到零度以下,可以产生以下变化:细胞器脱水,细胞中可溶性物质浓度升高,并在细胞内形成冰晶。
    如果缓慢冷冻,可使细胞逐步脱水,细胞内不致产生大的冰晶;相反,结晶很大,大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重结晶。
     1.冻存细胞
    (1)选对数增生期细胞,在冻存前1d换液。
    (2)按常规方法把培养细胞制备成悬液,计数,使细胞密度达5×106/m1左右密度,离心,去上清。
    (3)加入配制好的冻存液(培养液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10%二甲基亚砜(DMSO) 或甘油,它是一种渗透性保护剂,可迅速透入细胞,提高胞膜对水的通透性,降低冰点,延缓冻结过程,能使细胞内水分在冻结前透出细胞外,在胞外形成冰晶,减少胞内冰晶,从而减少冰晶对细胞的损伤
    (4)分装于无菌冻存管中,每管加1.5m1悬液。
    (5)旋好冻存管并仔细检查,一定要盖紧,作好标记。
    (6)冻存:在特殊的仪器或简易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40 min时间内,下降到液氮表面,再停30 min后,直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度,过快能影响细胞内水分透出,太慢则促进冰晶形成。
    标准程序:
    当温度在-25℃以上时, 1~2℃/min
    当温度达-25℃以下时, 5~10℃/min
    当温度达-100℃时,可迅速放入液氮中
    简易程序:
    将冷冻管(管口要朝上)放入纱布袋内,纱布袋系以线绳,通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口,按每分钟温度下降1~2℃的速度,在40分钟内降至液氮表面,停30分钟后,直接投人液氮中。
      操作时应戴防护眼镜和手套,以免液氮冻伤。
    2. 复苏细胞
    (1)从罐中取出冻存管。
    (2)迅速放入37℃水浴,不时摇动,使其急速融化,30~60s内完成。
    (3)冻存管用70%酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。
    (4)U-118 MG、U-118MG人脑星形胶质母细胞瘤低速离心(880r/min) 5 min,去上清后再用培养液洗一次。
    (5)用培养液适当稀释后,装入培养瓶37℃培养,次日更换一次培养液后,继续培养。以后仍按常规进行培养。
      冻存细胞数量要充分,密度应达到107/m1,在融后稀释20倍后,仍能保持5×105/m1数量。
    DSMZ细胞库 ACC 74 MEL-JUSO ACC 292 SF-158 ACC 153 FLK-BLV-044 ACC 472 CAT-13.0B10 ACC 90 WERI-RB-1
    DSMZ细胞库 ACC 330 JTC-27 ACC 410 MFE-280 ACC 633 U-2932 ACC 157 MHH-NB-11 ACC 430 SK-MM-2
    DSMZ细胞库 ACC 254 BEN ACC 526 KASUMI-2 ACC 517 HCC-1143 ACC 572 SU-DHL-6 ACC 738 MDA-MB-468
    ECACC细胞库 86052701 3T3 L1 90032601 CV-1 Clone B5 91091816 SK-HEP-1 94122104 DOK 6122002 CHP-134
    ECACC细胞库 86060301 SC-1 90040512 LA-4 8011101 Vero (AC-free) 94122105 SVCT 6120601 KARPAS 231
    ECACC细胞库 86060302 LBRM-33-1A5 90050801 MDBK 91091914 RT4 95010509 CA46 7030901 H157
    ECACC细胞库 86061001 RBL-1 90050803 NCTC 2071 91092002 70Z/3 7032901 CGR8 96020948 ChaGo-K-1
    ECACC细胞库 86061902 AC2 90060504 C127I 91100402 A2058 95011815 SK-N-BE(2) 6031001 BICR 16
    ECACC细胞库 86062401 BL-3 90061904 BCL1 Clone CW13.20-3B3 91110711 M1 95011816 BE(2)-M17 5092806 VP303

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